[发明专利]含鸡传染性法氏囊病病毒亚单位抗原的疫苗组合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种DNA序列，所述序列实质上编码含有SEQ.NO.2的氨基酸序列。

2.一种重组DNA表达载体，所述DNA表达载体的多克隆位点间包含如权利要求1所述的DNA序列，所述质粒包括pColdⅢ质粒。

3.一种鸡传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白，所述蛋白实质上含有SEQ.NO.2的氨基酸序列。

4.一种制备鸡传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

用如权利要求2所述的重组DNA表达载体转化大肠杆菌，诱导所述重组VP2蛋白的表达，回收并纯化表达的所述重组VP2蛋白；

其中，所述大肠杆菌包括DH5α、BL21。

5.一种纯化鸡传染性法氏囊病病毒重组抗原蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

将表达的所述重组抗原蛋白溶液和终浓度为1%的Triton X-114涡旋振荡；所述溶液混匀后在冰上放置5分钟，冷却后，所述溶液立即放入37℃水浴中温浴5min，使得所述溶液产生新的两相；然后所述溶液在37℃离心60s；离心过后，吸取所述溶液上部水相，使用所述水相再次用Triton X-114提纯，整个操作循环3次。

6.一种含鸡传染性法氏囊病病毒亚单位抗原的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物中内毒素含量为10~100EU/ml。

7.如权利要求6所述的疫苗组合物，其中，所述鸡传染性法氏囊病病毒亚单位抗原为免疫量的的重组VP2蛋白，所述疫苗组合物包括佐剂；优选地，所述的重组VP2蛋白AGP抗原效价在1:8-1:64之间，所述佐剂为油佐剂。

8.如权利要求6所述的疫苗组合物，所述疫苗组合物进一步包含其他抗原，所述抗原包括鸡新城疫抗原、鸡传染性支气管炎抗原。

9.一种制备如权利要求7所述的疫苗组合物的方法，用PBS磷酸盐缓冲液将所述重组VP2蛋白溶液稀释至600μg/mL，然后将所述重组蛋白溶液与佐剂按1:2的比例混匀，乳化。

10.权利要求6~7任一项所述的疫苗组合物在预防和治疗鸡传染性法氏囊病的应用。