[发明专利]一种利普司他汀生产工艺

说明书

技术领域

本发明属于药物合成领域，更具体的，本发明涉及一种利普司他汀的新的生产工艺。

背景技术

利普司他汀(英文名Lipstatin)，白色油状物，是一种用于生产新型减肥药奥利司他的医药中间体。奥利司他是由发酵物利普司他汀经一步加氢还原制得。奥利司他目前是全球唯一的减肥类药品，是长效和强效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂，它通过与胃和小肠腔内胃脂肪酶和胰脂肪酶的活性丝氨酸部位形成共价键使酶失活而发挥治疗作用，失活的酶不能将食物中的脂肪，主要是甘油三酯水解为可吸收的游离脂肪酸和单酰基甘油。未消化的甘油三酯不能被身体吸收，从而减少热量摄入，控制体重。

毒三素链霉菌(拉丁学名：Streptomycestoxytricini )为链霉菌科、链霉菌属，孢子丝长，顶端2-3圈紧密大螺旋形。孢子椭圆形至柱形，表面光滑。抑制金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、白色假丝酵母、颗粒青霉。

现有技术中，发酵生产利普司他汀的工艺存在生产成本高(约2500~3000元/千克)、发酵效价低(约7000mg/L)的缺点。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种生产成本低、发酵效价高的利普司他汀的新的生产工艺。

为实现上述发明目的，本发明采用了以下技术方案。

一种利普司他汀生产工艺，包括以下步骤：

(1) 按2%-10%的接种量，在发酵培养基中接种毒三素链霉菌菌液，26℃~30℃发酵140~198小时，控制发酵液pH值为6.8~7.8，搅拌速度为60-160rpm；所述菌液中菌种浓度为15%-25%；

以质量百分含量计，所述发酵培养基包括：甘油2.5%-6.5%、黄豆粉3%-8.5%、卵磷脂0.5%-2%、葵花油3%-10%、硫酸镁0.01%-0.15%、碳酸钙0.05%-0.4%；

(2) 发酵结束后，酸处理，使发酵液的pH值为2-7，喷雾干燥获得干菌丝体；

(3) 将干菌丝体加入1-14倍体积的丙酮中，浸泡8~24小时，板框过滤除去菌丝，收集滤液；

(4) 在滤液中加入纯水，得到浓度为35%~55%的丙酮溶液；加入12-18倍体积的正庚烷，萃取，收集正庚烷相；

(5) 减压浓缩至无馏分析出，制得正庚烷浓缩液；加入15-25倍体积的乙腈，冷却后，分层除油，收集乙腈相；

(6) 减压浓缩至无馏分析出，制得乙腈浓缩液；加入8-12倍体积的己烷，上硅胶柱进行吸附；吸附完毕后，己烷洗脱，收集洗脱液；

(7) 减压浓缩洗脱液至无馏分析出；二次结晶，收集晶体，减压浓缩，即得。

上述发酵培养基以黄豆粉、葵花油、甘油等作为主要氮源和碳源。所述发酵培养基的筛选，是在首先了解单个因素对毒三素链霉菌生长及利普司他汀表达的影响后，再通过正交实验综合考虑各因素之间的交互作用，经统计学分析后确定培养基配方的。同时进行发酵工艺检验和优选，从而选定发酵工艺，通过一系列纯化工艺检验与优化，从而确定了最终的纯化工艺。

优选地，步骤(1)中，所述发酵培养基包括：甘油4.5%、黄豆粉6.5%、卵磷脂4%、葵花油9%、硫酸镁0.15%、碳酸钙0.4%。

优选地，所述发酵培养基还包括适量微量元素。添加微量元素促进了菌种对数期前体物质的转化。

优选地，步骤(1)中发酵温度为27±1℃，发酵时间为140-192小时。

优选地，步骤(2)中采用25%-45%的硫酸进行酸处理，使发酵液的pH为4。

优选地，步骤(3)中加入10-14倍体积的丙酮中，浸泡12-16小时。

优选地，步骤(4)中丙酮溶液的浓度为45-55%。

优选地，步骤(6)中所述硅胶柱中的硅胶为80-120目。选择这样的目数是为了分离利普司他汀，使其与其他杂质分开。

通过上述工艺提高了发酵水平，使发酵水平达到10000mg/L以上，增加了回收率，使回收率达到75%。

本发明的利普司他汀生产工艺采用特定的发酵培养基发酵培养毒三素链霉菌，并通过控制发酵工艺和纯化工艺，经发酵、纯化、精制而获得利普司他汀，生产成本大大降低，发酵效价提高，具体地说，具有以下有益效果：

1、发酵时间短，一般6天即可达到最大发酵产量的90%；

2、菌体得率高，可达到250~350克（菌体湿重）/升（发酵液）；

3、发酵成本低，比当前成本低15%；

4、分离工艺精密，获得产物纯度高，获得的利普司他汀含量可以达到98%；