[发明专利]一种高细胞密度发酵制备小球藻的方法

权利要求书

1.一种高细胞密度发酵制备小球藻的方法，其特征在于采用光照、机械搅拌通气发酵和流加补碳补氮并行方式培养；该方法包括以下步骤：首先在发酵罐中安装防水、防爆照明灯，使得发酵液在发酵罐中处于照度为3500Lux的条件；先将含有5mL固体培养基的L管藻种在28℃下活化培养24h，然后在锥形瓶中光照液体摇瓶扩大培养，28℃振荡培养24h；再将扩大培养后的藻种接种到带有光照的全自动液体发酵罐的发酵培养基中26-30℃发酵培养，前8小时采用光照与低速搅拌微通气的方法进行，通气量0.1-0.3VVM；第9小时开始采用光照与机械搅拌通气发酵培养并行的方法进行；通气量1.0-1.5VVM，直至发酵结束；发酵24小时后，开始流加补碳和流加补氮，并始终保持发酵液中葡萄糖浓度在20％，NH₄NO₃浓度在15％，发酵进行至60小时，停止补料；发酵总时间为72小时；发酵结束后，将培养液离心，弃去上清，得小球藻；进行小球藻有效成分的检测；所述固体培养基、锥形瓶用液体培养基和发酵罐用发酵培养基成分分别为：

1)固体培养基成分：

葡萄糖2g/L、NaNO₃ 1.5g/L、MgSO₄.7H₂O 0.075g/L、CaCl₂.2H₂O 0.036g/L

酵母浸出粉0.03g／L，琼脂0.05g/L，pH 6.8；

2)锥形瓶用液体培养基成分：

葡萄糖2g/L、NaNO₃ 1.5g/L、MgSO₄.7H₂O 0.075g/L、CaCl₂.2H₂O 0．036g/L

酵母浸出粉0.03g/L，pH 6.8；

3)发酵培养基成分：

葡萄糖2g/L、NH₄NO₃1.5g/L、MgSO₄.7H₂O0.075g/L、CaCl₂.2H₂O 0.036g/L

酵母浸出粉0.05g／L，pH6.8。