[发明专利]一种丹酚酸A纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种丹酚酸A纯化方法。

技术背景

丹参制剂是我国心脑血管疾病的基本治疗药物，因疗效确切，丹参已成为我 国用量最大、销售额最高、制剂生产厂最多，临床剂型最全的中药之一。丹参有 效化学成分主要有两大类：脂溶性丹参酮类化合物和水溶性酚酸类化合物。研究 表明：丹酚酸类在抗肝脏损伤、抗动脉粥样硬化及细胞凋亡以及改善记忆功能障 碍等方面有着显著的活性。其中又以丹酚酸A(SaivianolicacidA)抗氧化活性最强。

丹酚酸A结构如下：

但是，丹酚酸A的天然含量极低(约为丹参药材的0.01-0.06％)，使得原药材 成本过高，分离纯化难度过大，严重制约着药物的开发和研究，成为其产业化的 瓶颈。现有技术中，也一直努力尝试找到一种适于实际生产应用的提取制备丹酚 酸A的生产工艺。例如，中国专利CN101041620A公开了采用水温浸、离心、 树脂层析、萃取、浓缩干燥制备丹酚酸A的方法，但其最终提取物得率为3‰， 产率低，生产成本高。又如，中国专利CN101121658A公开了水提取、高温高压 反应、树脂层析、萃取、真空干燥或冷冻干燥制备丹酚酸A的方法。而中国专 利CN101480423A公开了用乙醇/水洗脱大孔树脂所得的丹酚酸A溶液，干燥(优 选减压干燥或真空干燥)，得到丹酚酸A提取物最高含量为91.26％的方法。但上 述现有技术转化过程无法控制，转化副产物多，主产物丹酚酸A的产率较低。 并且对丹酚酸A的破坏很大，成本极高，所得的提取物有机溶剂残留严重，极 不易保存与使用。

综上所述，上述现有技术均存在实际生产过程中无法克服的缺陷。

发明内容

为克服上述缺陷，本发明提供了一种进一步纯化丹酚酸A并不破坏丹酚酸A 的纯化方法。

本发明提供的丹酚酸A纯化方法，其中将含有丹酚酸A的洗脱液或提取液； 采用如下步骤进一步纯化：

步骤一将所述洗脱液或提取液减压浓缩至每1ml含丹酚酸A1-10mg，调pH至 2.5～4.5，离心，上清液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，所述丹酚酸A 上样量与大孔吸附树脂比为1∶(35～70)，树脂柱径高比为1∶(4～30)，用水洗脱 后，用洗脱剂洗脱，高效液相检测丹酚酸A，收集含有丹酚酸A的洗脱液；

步骤二将步骤一得到的洗脱液浓缩至每ml含1-10mg丹酚酸A的溶液，用葡聚 糖凝胶LH-20或ODS-C18或聚酰胺层析柱分离，所述丹酚酸A上样量与层析柱 比为1∶(5～25)，树脂柱径高比为1∶(4～25)，用洗脱剂洗脱，高效液相检测丹酚 酸A，收集含有丹酚酸A的洗脱液，洗脱液减压回收并浓缩成水溶液； 步骤三将步骤二得到的水溶液调pH至2.0～4.0，经有机溶剂萃取，分离有机溶 剂相；

步骤四将步骤三得到的溶液减压回收有机溶剂，制成每1ml含丹酚酸A 500～10000mg的萃取液，用硅胶层析柱分离，用洗脱剂洗脱，高效液相检测丹酚 酸A，收集含有丹酚酸A的洗脱液；

步骤五将步骤四得到的洗脱液，减压回收洗脱剂，再加水溶解，微波真空干燥， 所述微波真空干燥温度：20-100℃，回差温度1-5℃，真空度-0.07Mpa以上，微 波功率1-100KW，干燥10-200分钟，得进一步纯化的丹酚酸A。

优选的，其中步骤一中所述大孔树脂柱为HPD-80、HPD-100、HPD-100B、 HPD-200A、HPD-300、HPD-450、HPD-722、HPD-826、ADS-5、ADS-8、ADS-21、 D101或AB-8。

优选的，其中步骤一中所述洗脱剂分别为水及不同比例的水与乙醇，并且先 用水与10～40％乙醇洗脱，除去杂质，再用20～60％乙醇洗脱。

优选的，其中步骤二中的所述洗脱剂分别为水及不同比例的水与乙醇，并且 先用水、20～60％乙醇溶液洗脱除杂，再用40～9％乙醇溶液洗脱。

优选的，其中步骤三中所述的有机溶剂为叔丁基甲基醚、乙酸甲酯、乙酸乙 酯、乙酸丁酯或甲酸乙酯。

优选的，其中步骤四中所述洗脱剂为石油醚、正戊烷、正庚烷、乙酸乙酯、 乙酸甲酯、甲酸乙酯、叔丁基甲基醚组成的两相溶剂。

优选的，其中步骤一中所述丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为 1∶(45～55)，树脂柱径高比为1∶(8～18)。