[发明专利]富集重镉的基因工程菌及其构建和应用

权利要求书

1.一株富集重镉的基因工程菌，其分类命名为恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）KT2440-SpPCS，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2012435。

2.权利要求1所述的臭假单胞菌（Pseudomonas putida）KT2440-SpPCS的构建方法，其特征在于：以环境模式菌株恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）KT2440为出发菌，重组表达粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）基因SpPCS，获得可以富集重金属镉的目标基因工程菌。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于具体步骤如下：

1）以粟酒裂殖酵母基因组DNA为模板，PCR扩增出SpPCS基因，经T-A克隆连接到测序载体PMD19-T Simple质粒，挑正确的转化子，经测序，比对正确，得到包含表达基因SpPCS的中间质粒PMD19-T-SpPCS； 

2）设计酶切位点将SpPCS插入到表达质粒pBBR1MCS-5载体的相应的酶切位点之间、连接获得重组质粒pBBR1MCS-5-SpPCS；

3）将构建好的重组质粒pBBR1MCS-5-SpPCS电击转化导入到恶臭假单胞菌KT2440的感受态细胞中，经50 μg/mL的庆大霉素筛选得到阳性转化子即恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）KT2440-SpPCS。

4. 权利要求1所述的恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）KT2440-SpPCS配合植物协同修复土壤重金属污染中的应用。