[发明专利]一种红景天药材中主要成分的含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药药材的检测领域，具体涉及中药药材红景天的检测方法。 

背景技术

大花红景天为景天科红景天属Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba植物的干燥根和根茎，为2010年版中国药典明确规定的仅此一种景天属植物的药用资源。我国为大花红景天的分布中心，储存量大，植物中含有红景天苷、酪醇、大花红天素、多酚类及多糖类等。现代药理研究表明红景天具有抗衰老、抗氧化性溶血、抗辐射等活性。近年来的“红景天热”使得红景天被广泛应用，其质量是保证药效的前提，有较多文献报道用高效液相法测定红景天药材中有效成分： 

目前有关红景天质量评价的报道较少，红景天的质量控制仅以红景天苷的含量为指标，这可能是由于市场上红景天植物来源复杂，各地习用品种也有所不同，这些评价方法存在一定的缺陷。建立高效、准确且适用性广的检测和评价方法，为红景天药材质量评价提供依据为当前需要解决的问题。 

发明内容

本发明的目的是提供红景天药材中主要成分的含量测定方法，所述测定方法利用高效液相色谱(HPLC)，在双波长下对红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇及对香豆酸成分的进行测定，可同时检测红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇及对香豆酸含量，所述检测方法具有高效、准确且适用性广等有益效果，可为红景天的质量评价提供依据。 

为实现上述目的，本发明的技术方案为： 

一种红景天药材中主要成分的含量测定方法，其特征在于，包括下述步骤： 

1)红景天药材供试品溶液制备： 

①取红景天药材用6～10倍量的水煎煮1～3h，过滤，得第一次滤液和滤渣，滤渣再加6～10倍量的水煎煮1～3h，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液并减压浓缩至滤液的1/20～1/12体积，获得浓缩液I； 

②用大孔树脂对浓缩液I进行纯化，以红景天药材与树脂的重量比1∶1～3进行上样；然后先以水洗脱，弃去水液，再以15～30％乙醇洗脱，收集15～30％乙醇洗脱液； 

③将洗脱液浓缩至密度1.05～1.10，得浓缩液II； 

④用75～85％乙醇醇沉浓缩液II12～36h，得上清液，弃沉淀； 

⑤将醇沉上清液浓缩、干燥、粉碎，获得红景天提取物； 

⑥称取红景天提取物，加入10～30％乙醇溶解并定溶，每毫升含红景天提取物1～5mg，即得； 

2)分别制备没食子酸对照品溶液、红景天苷对照品溶液、酪醇对照品溶液和对香豆酸对照品溶液； 

3)利用高效液相色谱分析法在双波长同时检测红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇和对香豆酸含量； 

色谱条件为：HPLC色谱柱为Phenomenex Luna C18柱，流动相为乙腈(A)-0.1～0.5％冰醋酸溶液(B)，洗脱程序为：0→5min，A从0线性上升至6～12％，B从100％线性下降至94～88％；5→30min，A从6～12％线性上升至20～30％，B从94～88％线性下降至80～70％；30→35min，A从20～30％线性上升至35～45％，B从80～70％线性下降至65～55％；柱温：20～40℃；体积流量0.5～1.5mL·min^-1；检测波长：275nm、308nm；进样量2～20μl； 

4)根据高效液相色谱分析结果计算红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇和对香豆酸的含量。 

进一步地，上述的含量测定方法，优选以20％乙醇为溶剂制备供试品溶液。 

进一步地，上述的含量测定方法的色谱条件为： 

HPLC色谱柱为Phenomenex Luna C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈(A)-0.3％冰醋酸溶液(B)，洗脱程序为：0～5min，9％A；5～30min，9％～25％A，30～35min，25％～40％A；柱温：40℃；体积流量0.7mL·min-1；检测波长：275nm、308nm；进样量10μl。 

进一步地，上述的含量测定方法，从红景天药材中制备供试品溶液包括以下步骤： 

1)取红景天药材用6～8倍量的水煎煮1～3h，过滤，得第一次滤液和滤渣，滤渣再加6～10倍量的水煎煮1～3h，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液并减压浓缩至滤液的1/20～1/12体积，获得浓缩液I；