[发明专利]一种红景天药材中主要成分的含量测定方法

权利要求书

1.一种红景天药材中主要成分的含量测定方法，其特征在于，包括下述步骤：

1)红景天药材供试品溶液制备：

①取红景天药材用6～10倍量的水煎煮1～3h，过滤，得第一次滤液和滤渣，滤渣再加6～10倍量的水煎煮1～3h，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液并减压浓缩至滤液的1/20～1/12体积，获得浓缩液I；

②用大孔树脂对浓缩液I进行纯化，以红景天药材与树脂的重量比1∶1～3进行上样；然后先以水洗脱，弃去水液，再以15～30％乙醇洗脱，收集15～30％乙醇洗脱液；

③将洗脱液浓缩至密度1.05～1.10，得浓缩液II；

④用75～85％乙醇醇沉浓缩液II12～36h，得上清液，弃沉淀；

⑤将醇沉上清液浓缩、干燥、粉碎，获得红景天提取物；

⑥称取红景天提取物，加入10～30％乙醇溶解并定溶，每毫升含红景天提取物1～5mg，即得；

2)分别制备没食子酸对照品溶液、红景天苷对照品溶液、酪醇对照品溶液和对香豆酸对照品溶液；

3)利用高效液相色谱分析法在双波长同时检测红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇和对香豆酸含量；

色谱条件为：HPLC色谱柱为Phenomenex Luna C18柱，流动相为乙腈(A)-0.1～0.5％冰醋酸溶液(B)，洗脱程序为：0→5min，A从0线性上升至6～12％，B从100％线性下降至94～88％；5→30min，A从6～12％线性上升至20～30％，B从94～88％线性下降至80～70％；30→35min，A从20～30％线性上升至35～45％，B从80～70％线性下降至65～55％；柱温：20～40℃；体积流量0.5～1.5mL·min^-1；检测波长：275nm、308nm；进样量2～20μl；

4)根据高效液相色谱分析结果计算红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇和对香豆酸的含量。

2.如权利要求1中任一项所述的测定方法，其特征在于，所述色谱条件为：

HPLC色谱柱为Phenomenex Luna C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈(A)-0.3％冰醋酸溶液(B)，洗脱程序为：0～5min，9％A；5～30min，9％～25％A，30～35min，25％～40％A；柱温：40℃；体积流量0.7mL·min^-1；检测波长：275nm、308nm；进样量10μl。

3.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，供试品溶液制备包括以下步骤：

1)取红景天药材用8倍量的水煎煮2h，过滤，得第一次滤液和滤渣，滤渣再加8倍量的水煎煮2h，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液并减压浓缩至滤液的1/16体积，获得浓缩液I；

2)用大孔树脂对浓缩液I进行纯化，以红景天药材与树脂的重量比1∶2进行上样；然后先以水洗脱，弃去水液，再以20％乙醇洗脱，收集20％乙醇洗脱液；

3)将洗脱液浓缩至密度1.05～1.10，得浓缩液II；

4)用80％乙醇醇沉浓缩液II24～32h，得上清液，弃沉淀；

5)将醇沉上清液浓缩、干燥、粉碎，获得红景天提取物；

6)称取红景天提取物，加入20％乙醇溶解并定溶，每毫升含红景天提取物2mg，即得。

4.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤2所述没食子酸对照品溶液、红景天苷对照品溶液、酪醇对照品溶液和对香豆酸对照品溶液的制备方法包括：分别称取适量没食子酸对照品、红景天苷对照品、酪醇对照品和对香豆酸对照品，用甲醇溶解并稀释成浓度为391.2μg·mL^-1的没食子酸对照品溶液、1460.0μg·mL^-1的红景天苷对照品溶液、1000.8μg·mL^-1的酪醇对照品溶液和517.6μg·mL^-1的对香豆酸对照品溶液。

5.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述红景天药材为大花红景天或大株红景天。