[发明专利]高效克隆筛选表达载体、其制备方法及用途

权利要求书

1.一种高效克隆筛选表达载体，其特征在于，该载体由piggyBac转座系统的ITRs序列插入到哺乳动物表达载体中得到。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述哺乳动物表达载体为pcDNA3.1(+)。

3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，该载体具有如SEQ ID No:3所示的序列。

4.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述哺乳动物表达载体为pcDNA4/TO。

5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，该载体具有如SEQ ID No:4所示的序列。

6.权利要求1至5任一项所述载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）以pGH为克隆载体，全基因合成5’ITR和3’ITR DNA片段，片段的两头加入EcoRV的酶切位点，得到载体pGH-ITR5和pGH-ITR3；

2）以pGH为克隆载体，全基因合成GeneBank序列号为EF587698的转录酶基因片段，且片段的两头分别加入EcoRI和HindIII的酶切位点，得到载体pGH-Transposase；

3）用EcoRV酶切载体pGH-ITR5和pGH-ITR3，EcoRI和HindIII酶切载体pGH-Transposase；

4）NruI酶切哺乳动物表达载体，同时EcoRI和HindIII酶切表达载体pTriEx2；

5）将片段ITR5连接到经过NruI酶切的哺乳动物表达载体，得到含ITR5片段的表达载体；

6）同时将片段Transposase连接到经过EcoRI和HindIII酶切的表达载体pTriEx2，得到新表达载体pTriEx2-Transposase；

7）Bstz17I酶切步骤5）得到的含ITR5片段的表达载体；

8）将片段ITR3连接到步骤7）得到的表达载体。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物表达载体包括pcDNA3.1(+)或pcDNA4/TO。

8.权利要求1至5任一项所述载体在筛选表达目的蛋白克隆中的应用。

9.权利要求1至5任一项所述载体在转染哺乳动物细胞中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述哺乳动物细胞包括人胚肾细胞HEK293或人宫颈癌细胞Hela。