[发明专利]一种快速检测沙门氏菌的荧光量子点筛选分离检测试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测沙门氏菌的荧光量子点筛选分离检测试剂盒，其特征在于，包括沙门氏菌分离试剂、沙门氏菌检测试剂、Buffer 1、Buffer 2；

所述沙门氏菌分离试剂为分散有免疫功能化磁珠的磷酸盐缓冲液，所述免疫功能化磁珠以Fe₃O₄核心，外层包裹二氧化硅的超顺磁性纳米磁珠颗粒，表面偶联兔抗沙门氏菌多克隆抗体；

所述沙门氏菌检测试剂为分散有免疫功能化荧光量子点的磷酸盐缓冲液，所述免疫功能化量子点为粒径为5-10nm，发射峰为530nm的CdTe量子点颗粒表面偶联兔抗沙门氏菌多克隆抗体；

所述Buffer 1含有pH=6.0，0.01M磷酸盐缓冲液；

所述Buffer 2含有pH=7.2，0.01M磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的沙门氏菌分离试剂的制备方法包括如下步骤：

（1）氨基化磁珠的制备：将Fe₃O₄纳米粒子分散于TritonX-100、环己烷和正己醇的混合体系中，用氨水调整体系的pH至8-10，滴加TEOS进行水解，得表面包裹二氧化硅的磁性纳米粒子，然后分散于甲醇和丙三醇的混合溶液（V甲醇：V丙三醇=3:1）中，再加入AEAPS反应5-6h，得表面修饰氨基的纳米粒子，即氨基化磁珠；

（2）连接抗体：将氨基化磁珠分散到磷酸缓冲液（0.01mol/mL，pH=7.4）中，加入终浓度为1%的戊二醛，室温搅拌反应3-4h后，用上述磷酸缓冲液洗去多余的戊二醛，加入沙门氏菌抗体继续反应3-4h后再加入4℃预冷的封闭液至终浓度为1mg/mL，4℃反应2h，固液分离，洗净多余抗体，得到的免疫化功能磁珠，将得到的免疫化功能磁珠重新分散于上述缓冲溶液中，4℃保存备用；所述封闭液为含10mg/mL牛血清白蛋白的缓冲液。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的沙门氏菌检测试剂的制备方法包括如下步骤：

将表面修饰有羧基的CdTe量子点加入磷酸盐缓冲液和交联剂的混合溶液中，室温下涡旋5-10min，再反应15-20min以活化量子点上的自由羧基；

加入保护剂,室温涡旋15-20min，反应60-70min；与兔抗沙门氏菌多克隆抗体上的末端氨基交联反应生成酰胺键，得到免疫化的量子点，分散于磷酸盐缓冲液（0.01mol/mL，pH=7.2）中，0～4℃保存；

兔抗沙门氏菌多克隆抗体与量子点的摩尔比为1：10至1：30；交联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；保护剂为N-羟基丁二酰亚胺。

4.权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，交联剂在混合溶液中的浓度为10mg/mL至50mg/mL。

5.权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，保护剂在混合溶液中的浓度为5mg/mL至20mg/mL。

6.一种使用权利要求1-5任意一项所述试剂盒快速检测沙门氏菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）取沙门氏菌分离试剂加入到根据中国国家标准GB4789.40-2010《食品微生物学检验》增菌处理后的样品中，35-37℃振荡2-3h，用Buffer1洗脱2-3次；

（2）将经步骤（1）处理后的反应液与免疫功能化量子点混合，35-37℃振荡2-3h，再用Buffer2洗脱3-4次；

（3）按上海地方标准DB31/T455-2009《食品中沙门氏菌、志贺氏菌量子点抗体快速筛选法》对步骤（2）所得产物进行检测。