[发明专利]在洗涤剂中具有改善稳定性的蛋白酶

说明书

本发明申请是基于申请日为2004年10月22日，申请号为200480031211.6(国际申请号为PCT/DK2004/000730)，名称为“在洗涤剂中具有改善稳定性的蛋白酶”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及具有在洗涤剂组合物中改善稳定性的蛋白酶。本发明还涉及编码所述蛋白酶的分离多核苷酸、核酸构建体、重组表达载体、包含所述核酸构建体的宿主细胞和用于生产和使用本发明蛋白酶的方法。此外，本发明涉及包含本发明蛋白酶的清洁组合物和洗涤剂组合物以及涉及所述蛋白酶在洗涤剂组合物中的用途。

发明背景

在洗涤剂工业中，向洗涤配方中添加酶的应用已超过30年。用于此类配方的酶包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、甘露糖苷酶以及其它酶或其混合物。商业上最重要的酶是蛋白酶。

在本领域内，例如在EP 130756(GENENTECH)(对应于美国再公告专利号34,606(GENENCOR))；EP 214435(HENKEL)；WO 87/04461(AMGEN)；WO 87/05050(GENEX)；EP 260105(GENENCOR)；Thomas、Russell和Fersht(1985)Nature 318 375-376；Thomas、Russell和Fersht(1987)J.Mol.Biol.193803-813；Russel和Fersht Nature 328 496-500(1987)；WO 88/08028(Genex)；WO 88/08033(Amgen)；WO 95/27049(SOLVAY S.A.)；WO 95/30011(PROCTER&GAMBLE公司)；WO 95/30010(PROCTER&GAMBLE公司)；WO 95/29979(PROCTER&GAMBLE公司)；US 5.543.302(SOLVAY S.A.)；EP 251 446(GENENCOR)；WO 89/06279(NOVOZYMES A/S)；WO 91/00345(NOVOZYMES A/S)；EP 525 610 A1(SOLVAY)；WO 94/02618(GIST-BROCADES N.V.)公开了为数众多的此类蛋白酶变体。

WO 89/06270(Novozymes A/S)公开了包含有限底物特异性蛋白酶的洗涤剂组合物，其中所述蛋白酶是能够断裂赖氨酸或精氨酸的C-末端侧肽键的胰蛋白酶样蛋白酶。

而WO 94/25583公开了编码镰孢霉属(Fusarium)胰蛋白酶样蛋白酶DNA序列的克隆并且从所述DNA序列中获得了活性胰蛋白酶样蛋白酶的表达。

然而，即便已经描述了众多有用的蛋白酶和蛋白酶变体，但是为了众多的工业用途仍需要进一步改善蛋白酶或蛋白酶变体。

具体而言，由于洗涤剂中存在的物质往往会降低蛋白酶的稳定性，所以蛋白酶在洗涤剂中的稳定性问题已经变得尤其明显。

因此，本发明的目标是提供改良的蛋白酶，所述蛋白酶适用于例如洗衣房和/或硬质表面清洁的洗涤剂中。

发明简述

本发明在第一个方面涉及具有在洗涤剂中稳定性改善的蛋白酶，所述蛋白酶选自

a.具有与如SEQ ID NO:2的第1-266位氨基酸所示氨基酸序列至少73%同一性的氨基酸序列的蛋白酶；

b.由在低严格条件下与下列序列杂交的核酸序列所编码的蛋白酶：

(i)如SEQ ID NO:1的第127-804位核苷酸所示的核酸序列的互补链，或

(ii)至少100个核苷酸的(i)的亚序列；以及

c.与如SEQ ID NO:2的第1-266位氨基酸所示氨基酸序列相比具有1-50、优选1-40或1-30、更优选1-20、最优选1-10个氨基酸替代的蛋白酶。

本发明在第二个方面涉及包含编码本发明蛋白酶的核酸序列的分离多核苷酸。

本发明在第三个方面涉及编码蛋白酶的分离多核苷酸，所述多核苷酸选自：

a.具有与如SEQ ID NO:1的第52-804位核苷酸所示核酸序列至少80%同一性的核酸序列；和

b.在低严格条件下与下列序列杂交的核酸序列：

(i)如SEQ ID NO:1的第52-804位核苷酸所示核酸序列的互补链；或

(ii)至少100个核苷酸的(i)的亚序列。