[发明专利]一种提高猪体细胞核移植效率的方法有效
| 申请号： | 201210474265.6 | 申请日： | 2012-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN102943093A | 公开（公告）日： | 2013-02-27 |
| 发明（设计）人： | 吴珍芳;贺晓燕;许卫华;石俊松;周荣 | 申请（专利权）人： | 广东温氏食品集团股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/877 | 分类号： | C12N15/877 |
| 代理公司： | 广州市深研专利事务所 44229 | 代理人： | 陈雅平 |
| 地址： | 527439 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 体细胞 移植 效率 方法 | ||
1.一种提高猪体细胞核移植效率的方法，其特征在于包括以下步骤：
S1、选择和培养卵母细胞；
S2、分离和培养供体细胞；
S3、采用盲吸法去除成熟卵母细胞核及第一极体，注入一个供体细胞于卵周隙中；电融合重构胚并激活重构胚；
S4、将重构胚置于含有浓度100-200μM的RG108和浓度100-500nM的Scriptaid的PZM-3培养液中培养14-16小时，再将重构胚置于PZM-3培养液中培养。
2.如权利要求1所述的提高猪体细胞核移植效率的方法，其特征在于：在S2步骤中选取猪耳皮成纤维细胞作为供体细胞。
3.如权利要求2所述的提高猪体细胞核移植效率的方法，其特征在于，选取猪耳皮成纤维细胞包括以下步骤：将猪耳皮组织块剪碎；用DMEM清洗组织碎末后用胎牛血清重悬并转移到培养皿中,37℃、5%CO2、饱和湿度环境中培养；5-7h后添加含10%胎牛血清的DMEM培养液；待细胞长至90%汇合时传代培养；用第3-5代的接触抑制的耳皮成纤维细胞作为核供体。
4.如权利要求1所述的提高猪体细胞核移植效率的方法，其特征在于：在S4步骤中，所述RG108的浓度为100-150μM。
5.如权利要求1所述的提高猪体细胞核移植效率的方法，其特征在于：在S4步骤中，所述RG108的最佳浓度为100μM。
6.如权利要求1所述的提高猪体细胞核移植效率的方法，其特征在于：在S4步骤中，所述Scriptaid的浓度为100-150nM。
7.如权利要求1所述的提高猪体细胞核移植效率的方法，其特征在于：在S4步骤中，所述Scriptaid的最佳浓度为100nM。
8.如权利要求1所述的提高猪体细胞核移植效率的方法，其特征在于：在S4步骤中，将重构胚置于含有RG108和Scriptaid的PZM-3培养液中培养14小时，再移入PZM-3培养液中培养。
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