[发明专利]检测肿瘤标志物流动注射化学发光免疫传感器的制备及应用

权利要求书

1.一种检测检测肿瘤标志物的流动注射化学发光传感器的制备方法，其包括以下步骤：

（1）利用聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）制备流动注射化学发光流通池；

（2）按照现有方法制备出碳量子点，碳包覆的四氧化三铁，二氧化硅和空壳金纳米粒子；

（3）将发光碳量子点修饰在碳包覆的四氧化三铁上，然后将一抗修饰在表面；

（4）将空壳金纳米粒子修饰在二氧化硅粒子上，然后将二抗和葡萄糖氧花酶修饰在空壳金粒子上；

（5）将制作好的化学发光传感器结合流动注射化学发光仪对免疫标记物进行检测。

2.本发明所述发光碳量子点修饰碳包覆四氧化三铁及空壳金包覆二氧化硅的制备包括以下步骤：

（1）碳包覆四氧化三铁的制备：将四氧化三铁浸入到硝酸溶液中超声10 min，后通过磁铁的作用进行分离，二次水冲洗，然后在5%的葡萄糖溶液中超声10 min，二次水冲洗，最后四氧化三铁的水溶液在高压釜中以180 ℃中反应10 h；

（2）碳量子点的制备：在pH 7.0的磷酸缓冲溶液（PBS）中，以石墨电极为工作电极，银/氯化银电极为参考电极，铂电极为对电极，在-3.0 V~3.0 V电压范围以0.1 V/s的扫速反应24 h，离心分离，二次水冲洗；

（3）将（1）制备的碳包覆四氧化三铁浸入到0.20%邻苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯（PDDA）中搅拌20 min使其表面带上正电，然后通过磁铁的作用进行分离，二次水冲洗；

（4）将（3）得到的碳包覆四氧化三铁浸入到（2）得到的碳量子点溶液中并搅拌20 min形成一碳量子点层；

（5）重复以上（3）（4）过程可以得到需要的量子点层数；

（6）（5）中制得碳量子点包覆磁性粒子浸入到1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺（EDC）溶液中20 min，然后通过磁铁的作用进行分离，PBS冲洗后将一抗加入，反应20 min，最后加入牛血清白蛋白（BSA）封闭活性位点，制备好的溶液保存在4 ℃的冰箱中待用；

（7）二氧化硅的制备：将3 mL的正硅酸四乙酸（TEOS）加入到40 mL的乙醇中搅拌10 min得到TEOS的均匀溶液B，将4 mL的氨水加入到40 mL的乙醇中搅拌10 min得到氨水的均匀溶液A，将B液缓慢加入到A液中，搅拌12 h，离心分离，二次水冲洗；

（8）空壳金粒子的制备：在2.5mL 4.8mM的氯金酸中加入25 mL 10 mM四甲基溴化磷搅拌5 min，然后再加入0.2 mL 0.5 M的硼氢化钾搅拌10 min，离心分离，二次水冲洗；

（9）将（7）制得的二氧化硅纳米粒子浸入3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）中并搅拌1 h，离心分离，二次水冲洗；

（10）将（9）离心的二氧化硅浸入到（8）制得空壳金粒子中并搅拌1h，离心分离，二次水冲洗；

（11）将（10）制备粒子中加入二抗和葡萄糖氧化酶中30 min，最后用BSA 封闭活性位点，制备好的溶液保存在4℃的冰箱中待用；

（12）利用流动注射在磁铁的作用下依次注入修饰一抗的磁性粒子，抗原，修饰二抗的复合粒子，最后通入葡萄糖溶液和硝酸的混合溶液进行化学发光的测定。