[发明专利]快速检测诱导性多潜能干细胞的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测干细胞的试剂盒,尤其涉及一种快速检测诱导性多潜能干细胞的试剂盒。

背景技术

干细胞(stem cells)是人体及其各种组织细胞的初始来源，其最显著的生物学特征是既有自我更新和不断增殖的能力，又有多向分化的潜能。胚胎干细胞(ES)来源于受精卵发育分化的胚胎内细胞团或原始生殖脊一种多能细胞系，它具有与早期胚胎细胞相似的形态特征和很强的分化能力，可以无限增殖并分化成为全身200多种细胞类型，从而可以进一步形成机体的任何组织或器官。

有关ES细胞和治疗性克隆的研究一直存在激烈的伦理学争论，近年来国外学者通过体细胞体外基因转染技术建立诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPS细胞)系。日本京都大学物质-细胞统合系统据点iPS细胞研究中心长山中伸弥与英国发育生物学家约翰··戈登因在细胞核重新编程研究领域的杰出贡献，因此获得2012年诺贝尔生理学或医学奖。山中伸弥是诱导多功能干细胞(iPS cell)创始人之一。2007年，他的研究团队通过对小鼠的实验，发现诱导人体表皮细胞使之具有胚胎干细胞活动特征的方法。此方法诱导出的干细胞可转变为心脏和神经细胞，为研究治疗目前多种心血管绝症提供了巨大助力。这一研究成果在全世界被广泛应用，因为其免除了使用人体胚胎提取干细胞的伦理道德制约。诱导多能干细胞(iPS细胞)的研究成果在干细胞研究领域中无疑是具有里程碑意义的突破，多种体细胞经过体外的培养和诱导均可转变成为具有多向分化潜能的干细胞，并且证明了几种已知的转录因子可以使已分化的体细胞逆转为未分化的状态，从而阐明了细胞的巨大可塑性。由于iPS细胞研究不再使用人类早期胚胎，故卵母细胞来源的难题得到了合理的解决，伦理学的争论将随之平息，自体iPS细胞来源的细胞移植给患者自身也将使免疫排斥反应的难题迎刃而解。

研究证实采用体外导入Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4等4个转录因子可将小鼠体细胞直接重构成为ES细胞样的多潜能细胞,因此，这类细胞被命名为诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)。同样，转染上述因子或Oct4、Sox2、Nanog、LIN28等4个因子也能够使人类体细胞重构为iPS细胞，后者与人类ES细胞的基本特征相似。

干细胞的鉴定尤其是成体干细胞鉴定是干细胞研究领域的一个难题，目前，对很多种成体干细胞并没有一个一致的鉴定标准。但在诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)的鉴定方面,采用标志物Oct4、Sox2、Nanog和LIN28来鉴定人诱导性多潜能干细胞，用标志物Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4来鉴定小鼠诱导性多潜能干细基本上在本领域得到了公认。然而，目前对这些生物标志物的检测是分开进行的，这不仅耗费时间，而且各标志物之间的定量关系不能准确地得到反映。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种可在一次试验中同时检测全部多潜能干细标志物,从而实现快速鉴定多潜能干细胞(iPS细胞)的试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种快速检测诱导性多潜能干细胞的试剂盒，包括：用于快速检测诱导性人或鼠多潜能干细胞的检测板、示踪液、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、洗涤液和显色液。

一种快速检测诱导性多潜能干细胞的试剂盒，包括：用于快速检测诱导性人或鼠多潜能干细胞的检测板、生物标志物标准液、反应液、亲和素探测液、样品稀释液、洗涤液和显色液。

所述的检测板是固定了Oct4、Sox2、Nanog、LIN28中任何两种及以上的人生物标志物抗原的固相；所述的固相为酶标盘的反应槽、生物芯片的基片、免疫印迹膜、磁珠；所述抗原为所述生物标志物的整个蛋白或仅含相关蛋白的部分氨基酸序列多肽。

所述含有Oct4、Sox2、Nanog、LIN28中任何两种及以上的人生物标志物的抗原组合被包被在酶标盘的同一个反应槽内。

所述含有Oct4、Sox2、Nanog、LIN28中任何两种及以上人生物标志物的抗原被分别包被在同一个酶标盘或分开的酶标盘的不同的反应槽内。

所述检测板是固定了任何两种及以上能识别Oct4、Sox2、Nanog、LIN28人生物标志物的特异抗体的固相；所述固相为酶标盘的反应槽、蛋白芯片用玻片或塑胶片、免疫印迹膜、磁珠；所述的特异抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。