[发明专利]一种目的蛋白制备方法及其用途

权利要求书

1.一种目的蛋白的制备方法，其特征是：包括如下步骤，

目的蛋白核苷酸序列片段的获得；

目的蛋白重组表达载体的构建；

目的蛋白的诱导表达；

目的蛋白的纯化；

纯化产物的切割；

所述目的蛋白核苷酸序列片段的前面插入单体切割的识别位点；

所述目的蛋白通过PCR扩增得到，通过引物引入单体切割的识别位点；

优选的，目的蛋白是人神经生长因子，胸腺肽、虎纹克胰肽、虎纹镇痛肽。

2.权利要求1的制备方法，其特征在于，在纯化之前还包括鉴定蛋白表达的步骤。

3.权利要求1或2的制备方法，其特征在于，所述目的蛋白重组表达载体构建中的目的蛋白基因是一个或一个以上拷贝；

任选地，所述目的蛋白基因的一个以上拷贝数通过将含有一个以上拷贝目的蛋白基因的表达盒与表达载体构建来实现；

任选地，当得到一个拷贝数的重组表达载体时，在此基础上经过酶切连接等方法重组得到两个拷贝数的重组表达载体；

依次类推，得到两个以上拷贝数的各重组表达载体。

4.权利要求1或2的制备方法，其特征在于，所述的单体切割的识别位点是根据密码子规则编码的氨基酸序列，优选地，单体切割的识别位点序列编码为单个氨基酸或两个氨基酸或三个氨基酸或六个氨基酸；更优选地，所述单个氨基酸为R或W或M或D或E或K；两个氨基酸为D-P或N-G；三个氨基酸为R-K-R或R-R-R；六个氨基酸为L-V-P-R-G-S。

5.权利要求4的制备方法，其特征在于，所述的单体切割的识别位点可通过定点突变目的基因来实现；优选地将人神经生长因子的第158和第213位的甲硫氨酸突变为苏氨酸。

6.权利要求3的制备方法，其特征在于，所述的表达载体为原核表达系统，优选为pET系统、pGEX系统、pMAL系统；更优选地，原核表达系统经过了改造，以使载体上的部分酶切位点不被相应的酶识别。

7.权利要求1或2的制备方法，其特征在于，所述的目的蛋白的纯化为采用亲和层析柱进行纯化，优选地，亲和层析柱的标签为His标签、GST标签、MBP标签。

8.权利要求1或2的制备方法，其特征在于，所述纯化产物的切割包括化学试剂或酶切割，以获得纯化的目的蛋白重组蛋白；优选地，化学试剂为溴化氰、甲酸或羟胺，酶试剂为胰蛋白酶、梭菌蛋白酶、弗林蛋白酶、凝血酶或亮氨酸氨肽酶。

9.权利要求1-8任一方法所得的目的蛋白。

10.权利要求9的目的蛋白用于医药的用途。