[发明专利]一种目的蛋白制备方法及其用途

权利要求书

1.一种目的蛋白的制备方法，其特征是：包括如下步骤，

目的蛋白的核苷酸序列片段的获得；

目的蛋白重组表达载体的构建；

目的蛋白的诱导表达；

目的蛋白的纯化；

纯化产物的切割；

所述目的蛋白的核苷酸序列片段的下游引入单一切割位点；

所述目的蛋白通过合成编码链和模板链，将两者杂交获得，在合成编码链和模板链时引入单体切割的识别位点；

优选地，所述目的蛋白是人神经生长因子，胸腺肽、虎纹克胰肽、虎纹镇痛肽。

2.权利要求1的构建方法，其特征在于，在切割步骤后还包括进一步纯化的步骤；

任选地，还包括目的蛋白活性测定。

3.权利要求1或2的构建方法，其特征在于，所述目的蛋白基因是1或1个以上拷贝；优选地，所述目的蛋白基因的1个以上拷贝数通过将目的蛋白基因片段进行体外串联连接来实现。

4.权利要求1或2的构建方法，其特征在于，所述的单一切割位点是根据密码子规则编码的氨基酸序列；优选地，所述氨基酸序列为R或W或M或D或E或K。

5.权利要求1或2的构建方法，其特征在于，所述目的蛋白基因的核苷酸序列片段的获得为，合成目的蛋白基因模板链和编码链；经过变性退火处理将编码链和模板链杂交获得杂交双链，杂交双链在反应体系中具有逐一定向连接形成多聚体的特征，所述多聚体含有2个及以上拷贝数目的蛋白基因片段；

优选的，还可以包括将形成的多聚体作为聚合酶链式反应的模板进行更多目的蛋白基因拷贝数的获得。

6.权利要求1或2的构建方法，其特征在于，所述的表达载体为原核表达系统，优选为pET系统、pGEX系统、pMAL系统；

任选地，所述的目的蛋白的纯化为采用亲和层析柱进行纯化，优选为，亲和层析柱的标签为His标签、GST标签、MBP标签。

7.权利要求1或2的构建方法，其特征在于，所述纯化产物的切割可以是化学试剂或酶切割，优选地是BrCN切割。

8.权利要求2的构建方法，其特征在于，所述进一步纯化为采取HPLC纯化。

9.权利要求1－8任一方法所得的目的蛋白。

10.权利要求9的目的蛋白用于医药的用途。