[发明专利]一种凝结芽孢杆菌及其高密度发酵的工艺

权利要求书

1.一种芽孢杆菌，其分类命名为凝结芽孢杆菌菌株，菌种的拉丁学名是：Bacillus coagulans，参据的菌株为：NJYHHWG 877005，保藏日期是2012年10月18日，保藏中心登记入册编号是CGMCC No.6681。

2.一种利用如权利要求1所述的凝结芽孢杆菌进行高密度发酵的工艺，其具体步骤如下：从营养琼脂培养基挑取凝结芽孢杆菌菌体，接入种子液培养基摇瓶培养得发酵种子液；取发酵培养基体积的4～20%的发酵种子液接入灭菌后装有发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养；通过反馈补料法控制营养物质的浓度进行高密度发酵，控制温度、通气量和转速，发酵培养48～78h得发酵液。

3.根据权利要求2所述的工艺，其特征在于培养发酵种子液是从35～42℃培养50～72h后的营养琼脂培养基上挑取菌体，接入装有种子液培养基的无菌锥形瓶中，35～42℃条件下摇床培养，控制转速140～200rpm，32～48h后得发酵种子液；其中锥形瓶中装的种子液培养基量为锥形瓶体积的5～25%。

4.根据权利要求2所述的工艺，其特征在于所述的种子液培养基组分为：蛋白胨8～15g/L，酵母膏3～8g/L，NaCl 4～8g/L，葡萄糖35～70g/L，pH控制在6.5～7.8。

5.根据权利要求2所述的工艺，其特征在于发酵培养基组分：蛋白胨8～15g/L，酵母膏3～8g/L，NaCl 4～8g/L，葡萄糖35～70g/L，CaCO₃10～15g/L，K₂HPO₄0.8～1.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1～0.6g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.005～0.015g/L，MnCl₂·4H₂O 0.001～0.005g/L，pH保持在6.5～7.8；发酵罐装液量为发酵罐体积的20～45%。

6.根据权利要求2所述的工艺，其特征在于所述的反馈补料为分阶段进行补料流加，发酵进行16～26h开始流加底物A，并以发酵液中pH值来指导底物流加速度，使pH值保持在6.5～7.8；在发酵进行12～24h开始，流加底物B，并以葡萄糖的浓度来指导底物流加速度，使发酵罐内葡萄糖内浓度控制在50～70g/L，发酵32～44h；其中底物A成份为：CaCO₃55～85g/L，(NH₄)₂HPO₄50～80g/L；底物B成份为：葡萄糖200～400g/L，酵母膏50～80g/L，K₂HPO₄4.5～8.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.57～3.5g/L。

7.根据权利要求2所述的工艺，其特征在于发酵培养过程中控制温度在36～42℃；通入无菌空气，保持通气量在3～6L/(L·min)以控制溶氧在30～45%；控制转速在140～200rpm。