[发明专利]假马齿苋总皂苷在制备抗脑缺血药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取物，具体涉及中药提取物的应用，尤其涉及从假马齿苋（Bacopa Monnieri（L.）Wettst）中提取分离得到的假马齿苋总皂苷在制备防治抗脑缺血药物中的应用。 

背景技术

假马齿苋系玄参科植物假马齿苋(Bacopa Monnieri(L.)Wettst)的全草，中医理论描述了假马齿苋具有清热凉血，解毒消肿的功效，用于治疗痢疾、目赤肿痛、丹毒、痔疮肿痛、象皮肿等症状。 

印度阿育吠陀医药体系（Ayurvedic system of medicine）认为假马齿苋能增强智力和改善记忆，具有延缓衰老、预防痴呆，镇静、催眠，抗老年痴呆之功效。假马齿苋提取物制成的制剂已在印度上市，作为治疗记忆损伤和抗老年痴呆的辅助药物。但至今，假马齿苋中尚未开发出任何形式的药物。本发明人前期通过神经保护活性指导下的化学成分系统分离方法对假马齿苋药材进行了系统的活性成分研究，从假马齿苋提取物中纯化得到一个神经保护活性非常强的三萜类化合物Bacopaside I，如下结构式表示： 

药理研究结果表明，Bacopaside I对过氧化氢（H₂O₂）和谷氨酸（L-Glutamate）诱导的大鼠皮层神经元和嗜铬细胞瘤细胞（PC 12cells）损伤具有显著的保护作用，且保护作用呈现剂量依赖关系，具有潜在的抗老年痴呆活性，可以开发新药。经本发明人的进一步研究，证实了假马齿苋提取物具有防治脑缺血的作用，可以研究开发防治抗脑缺血药物。经查询，在本发明前尚未有该相关药物的报道。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于研究开发假马齿苋提取物作为制备防治抗脑缺血药物。 

本发明提供了假马齿苋总皂苷在制备防治脑缺血药物中的应用。 

本发明所述假马齿苋总皂苷主要含有下列达玛烷型三萜皂苷化合物： 

Bacopaside I，Bacoside A3，Bacopaside II，BacopasaponinC isomer及Bacopasaponin C： 

通过检测，上述5个皂苷化合物的总量在假马齿苋总皂苷中的含量为50%-55%（重量%）。 

本发明所述假马齿苋总皂苷制备方法包括以下步骤： 

(1)取假马齿苋药材重量12倍量的40-70%乙醇浸泡60min，煎煮120min，重复三次，合并提取液，过滤去沉淀； 

(2)上清液通过HP-20大孔树脂，以10倍柱体积量去离子水洗去水溶性杂质，再先后以5倍柱体积量40%乙醇、5倍柱体积量75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液备用； 

(3)取75%乙醇洗脱液，低温蒸去乙醇至无醇味，浓缩至干，80℃减压干燥24h至恒重，得假马齿苋总皂苷固体。 

BacopasideI、Bacoside A3、BacopasideII、BacopasaponinC isomer及Bacopasaponin C五种单体标准品制备采用液相制备得到：色谱条件为：35%乙腈/65%水，以1.8ml/min流速等度洗脱，检测波长为205nm。分别接取无杂峰干扰的五个化合物，蒸干即得。 

本发明的另一目的提供了Bacopaside I在制备防治脑缺血药物中的应用。 

本发明所述Bacopaside I制备方法包括以下步骤： 

(1)药材处理：假马齿苋粉碎成粉末，以甲醇-水体积比9:1溶解，过滤，滤液通过上90%甲醇平衡的三菱化学手性柱，再经90%甲醇洗脱，蒸干得浸膏； 

(2)提取：脱色后浸膏与硅胶等比拌样后进行中压制备，中压条件为：压力25bar、流速6ml/min、水相70%-10%、甲醇30%-90%、总时间6.5h，其中0.5h为平衡柱子时间；收集到的提取物通过板层析(展开剂为乙酸乙酯：甲醇：水=20:3.4:2.7)，与Bacopaside I标准品对照找到所需的点，收集所需提取物蒸干； 

（3）纯化：氯仿与甲醇等体积混合溶剂溶解(2)得到的提取物，通过LH-20凝胶柱，以氯仿与甲醇等体积混合溶剂冲洗，得到纯化的Bacopaside I，经C谱、H谱、DEPT谱以及质谱鉴定确认与标准品一致。