[发明专利]一种制备脂肪酶抑制剂奥利司他的方法

说明书

技术领域

本发明属于分离工程技术领域，涉及一种制备奥利司他的方法，具体涉及一种利用混合溶剂超声波法初提链霉菌菌丝体中的利普司他汀，将利普司他汀粗提物氢化后，利用大孔树脂提取得到奥利司他纯品的方法。

背景技术

伴随着科技的飞速发展、物质生活条件的改善和丰富膳食的获得，肥胖症已逐渐成为当今世界一大多发性疾病。当人体进食热量多于消耗热量时，多余热量以脂肪的形式储存于体内，久而久之造成肥胖。无明显病因可寻者成为单纯性肥胖，具有明确病因者称之为继发性肥胖。随着人们物质生活水平的不断提高，单纯性肥胖正逐渐成为一种较为常见的病症。不仅影响美观而且可能诱发多种疾病如非胰岛素依赖型糖尿病、心脏病、脑血管疾病、呼吸系统疾病、某些癌症。因此对它的防治有着十分重要的临床意义。科学家们从未停止过对新的安全性较高的治疗肥胖药物的研究和开发。目前，应用的减肥药主要分为食欲抑制剂、产热剂、消化吸收阻滞剂、激素调控剂四大类。

利普司他汀是Stretomyces toxytricini(毒三素链霉菌)的代谢产物，能选择性抑制肠道中的胰脂肪酶的活性，减少脂肪的水解和吸收；其四羟基衍生物奥利司他已被Roche公司开发为减肥药物，于1997年得到美国FDA认证。目前已在全球100多个国家上市，拥有900多万的使用者，占全球2/3的减肥药市场份额。是目前上市的减肥药物中，唯一一个作为非中枢神经系统作用上市的治疗肥胖症的药物。奥利司他是一种安全的肥胖治疗药物，不仅可以减轻患者体重，而且可以改善血脂浓度、降低血压、改善血糖控制、降低患心血管等疾病的危险；该药物可降低吸收大约30%的脂肪，确保患者能减轻体重。人体对奥利司他的吸收率低于1%，因此不会引起全身性副作用；奥利司他抑制食物中脂肪的吸收，会导致油样便，服用者的轻重程度随饮食中脂肪含量的不同而不同，患者可通过调整饮食结构，减少脂肪的摄入量。

正是由于奥利司他具有高效、安全、毒副作用小等优点，在中国上市的短时间内，市场份额迅速上升，已成为减肥药品市场的一线产品，课题组通过大量的实验研究，确定了应用大孔树脂提取利普司他汀及制备奥利司他的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用超声波法初提链霉菌菌丝体中的利普司他汀，将利普司他汀粗提物氢化后，利用大孔树脂及混合洗脱溶剂提取得到奥利司他纯品的方法。

为达到上述目的，可通过如下技术方案实现：

一种制备奥利司他的方法，包括以下几个步骤：

A、将链霉菌发酵后得到的利普司他汀产生菌菌丝体，清洗后悬浮在萃取剂中，控制pH值在4.0~9.0之间进行微生物细胞破碎，得到含有利普司他汀的混合物；

B、将含有利普司他汀的混合物振荡提取，得到含有利普司他汀的提取液；

C、将含有利普司他汀的提取液离心，收集上清液，将上清液减压浓缩至无液体，得到利普司他汀粗提品；

D、将利普司他汀粗提品溶于溶剂中，在钯催化剂作用下进行催化加氢得到奥利司他，重结晶得到奥利司他粗品；

E、用溶剂溶解奥利司他粗品，采用大孔树脂静止吸附2~5h，再用两种洗脱剂共同进行梯度洗脱，最后浓缩干燥后得到奥利司他纯品。

本发明中的原料利普司他汀产生菌菌丝体，是利用链霉菌发酵生产利普司他汀发酵液中的菌丝体，本发明对链霉菌的种类并无具体要求，只要是能够发酵生产利普司他汀的链霉菌都可以应用。作为举例，本发明的实施例中采用购自美国农业研究菌种保藏中心的链霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443的发酵液。

步骤A中，采用超声仪进行微生物细胞破碎。

其中的萃取剂为甲醇、乙醇、甲醇水溶液、乙醇水溶液、氯化钠与甲醇、氯化钠与乙醇或其水溶液，其中甲醇或乙醇体积浓度为10%~100%（100%即纯溶剂），氯化钠的浓度为0.01~0.1mol/L，优选0.03~0.09mol/L。

其中利普司他汀产生菌菌丝体与萃取剂的质量体积比为1：10~200g/mL，优选1：10~100g/mL，进一步优选1：10~50g/mL。

步骤A中菌丝体的清洗可直接采用去离子水。

步骤B中，优选采用摇瓶柜进行振荡提取，调节摇瓶柜的温度10~20℃（优选15℃），转速100~300rpm（优选180rpm），提取时间为1.0~4.0h。