[发明专利]噻苯隆抗原及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种噻苯隆抗原及其制备方法与应用。

背景技术

噻苯隆（Thidiazuron），化学名为1-苯基-3-（1,2,3-噻二唑-5-基）脲，CAS登记号：51707-55-2；分子式为：C₉H₈N₃OS；相对分子量为：220.2。噻苯隆在棉花种植上作落叶剂使用，被植株吸收后，可促进叶柄与茎之间的分离组织自然形成而脱落，是很好的脱叶剂。其化学结构式如下：

目前，噻苯隆的分析方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液质联用法（HPLC-MS/MS）等。但是这几种检测方法需要使用昂贵的仪器设备，检测费用高，耗时长，不适用于现场快速检测。与仪器分析法相比，免疫分析法具有快速、简便、实时、易于进行现场检测、样品前处理简单、灵敏度高、选择性强、适合于高通量分析等优点，而且还能大幅度降低检测成本。

发明内容

本发明的目的是提供一种噻苯隆抗原及其制备方法与应用。

本发明提供的式A所示噻苯隆抗原，

式A

式A中，n为0~6的整数；Protein表示载体蛋白，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。

本发明提供了了式A所示噻苯隆抗原的制备方法，包括如下步骤：

（1）5-氨基-1,2,3-噻二唑与式B所示含有酯基的苯异氰酸酯进行反应得到式C所示化合物；

式B                                                    式C

式B和式C中，n为0~6的整数；

（2）在酸或碱存在的条件下，式C所示化合物经水解反应得到式D所示化合物；

式D

式C中，n为0~6的整数；

（3）式D所示化合物和N-羟基琥珀酰亚胺在二环己基碳二亚胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐存在的条件下进行偶联反应得到式E所示化合物；

式E

式E中，n为0~6的整数；

（4）式E所示化合物与载体蛋白经偶联反应即得式A所示噻苯隆抗原；所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。

上述的制备方法中，步骤（1）中，式B所示含有酯基的苯异氰酸酯选自4-异氰酸酯基-苯甲酸乙酯、4-异氰酸酯基-苯乙酸乙酯、4-异氰酸酯基-苯丙酸乙酯、4-异氰酸酯基-苯丁酸乙酯、4-异氰酸酯基-苯戊酸乙酯和4-异氰酸酯基-苯己酸乙酯中至少一种。

上述的制备方法中，步骤（1）中，所述5-氨基-1,2,3-噻二唑与式B所示含有酯基的苯异氰酸酯的摩尔份数比可为（1~10）：1；

所述反应的温度可为0~100℃，时间可为6~48小时；

所述反应的溶剂选自甲苯、苯和二甲苯中至少一种。

上述的制备方法中，步骤（2）中，所述酸选自浓盐酸、浓硫酸、冰醋酸和甲酸中至少一种；所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾中至少一种。

上述的制备方法中，步骤（3）中，式D所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与二环己基碳二亚胺的摩尔份数比可为1：（1~5）：（1~5）；

式D所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔份数比可为1：（1~5）：（1~5）；

所述偶联反应的温度可为0~50℃，时间可为4~24小时。

上述的制备方法中，步骤（4）中，式E所示化合物与所述载体蛋白的摩尔份数比可为（5~30）：1；

所述偶联反应的温度可为0~50℃，时间可为8~36小时；所述偶联反应在pH值为5~9的条件下进行；

式E所示化合物在所述载体蛋白的溶液中进行偶联反应，所述载体蛋白的溶液是由所述载体蛋白加入至缓冲溶液中得到的，所述缓冲溶液选自碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中至少一种，所述缓冲液的pH值均可为7.5；

步骤（4）之后，所述方法还包括将所述偶联反应的反应体系进行透析的步骤；所述透析步骤中，所用透析液为pH值可为4~10、浓度可为0.01~0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液。

本发明提供的噻苯隆抗原是噻苯隆与载体蛋白通过酰胺键连接形成的偶联物；所述酰胺键是式D上的羧基通过活泼酯与载体蛋白上的氨基形成的。