[发明专利]噻苯隆抗原及其制备方法与应用

权利要求书

1.式A所示噻苯隆抗原，

式A

式A中，n为0~6的整数；Protein表示载体蛋白，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。

2.式A所示噻苯隆抗原的制备方法，包括如下步骤：

（1）5-氨基-1,2,3-噻二唑与式B所示含有酯基的苯异氰酸酯进行反应得到式C所示化合物；

式B                                        式C

式B和式C中，n为0~6的整数；

（2）在酸或碱存在的条件下，式C所示化合物经水解反应得到式D所示化合物；

式D

式C中，n为0~6的整数；

（3）式D所示化合物和N-羟基琥珀酰亚胺在二环己基碳二亚胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐存在的条件下进行偶联反应得到式E所示化合物；

式E

式E中，n为0~6的整数；

（4）式E所示化合物与载体蛋白经偶联反应即得式A所示噻苯隆抗原；所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，式B所示含有酯基的苯异氰酸酯选自4-异氰酸酯基-苯甲酸乙酯、4-异氰酸酯基-苯乙酸乙酯、4-异氰酸酯基-苯丙酸乙酯、4-异氰酸酯基-苯丁酸乙酯、4-异氰酸酯基-苯戊酸乙酯和4-异氰酸酯基-苯己酸乙酯中至少一种。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述5-氨基-1,2,3-噻二唑与式B所示含有酯基的苯异氰酸酯的摩尔份数比为（1~10）：1；

所述反应的温度为0~100℃，时间为6~48小时；

所述反应的溶剂选自甲苯、苯和二甲苯中至少一种。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述酸选自浓盐酸、浓硫酸、冰醋酸和甲酸中至少一种；所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾中至少一种。

6.根据权利要求2-5中任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，式D所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与二环己基碳二亚胺的摩尔份数比为1：（1~5）：（1~5）；

式D所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔份数比为1：（1~5）：（1~5）；

所述偶联反应的温度为0~50℃，时间为4~24小时。

7.根据权利要求2-6中任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，式E所示化合物与所述载体蛋白的摩尔份数比为（5~30）：1；

所述偶联反应的温度为0~50℃，时间为8~36小时；所述偶联反应在pH值为5~9的条件下进行；

式E所示化合物在所述载体蛋白的溶液中进行偶联反应，所述载体蛋白的溶液是由所述载体蛋白加入至缓冲溶液中得到的，所述缓冲溶液选自碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中至少一种，所述缓冲液的pH值均为7.5；

步骤（4）之后，所述方法还包括将所述偶联反应的反应体系进行透析的步骤；所述透析步骤中，所用透析液为pH值为4~10、浓度为0.01~0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液。

8.一种抗体，其由式A所示噻苯隆抗原制备得到。

9.式A所示噻苯隆抗原和/或权利要求8所述抗体在检测样品中噻苯隆中的应用；

式A所示噻苯隆抗原和/或权利要求8所述抗体在制备用于检测样品中噻苯隆的酶联免疫试剂盒、噻苯隆的发光免疫试剂盒或免疫亲和色谱柱中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述检测样品为水体、药品、食品或土壤。