[发明专利]一种裸眼和荧光增强检测含巯基氨基酸荧光分子探针的合成及应用

说明书

技术领域

本发明涉及的是化学分析检测技术领域，具体涉及一种裸眼及荧光增强检测含巯基氨基酸荧光分子探针的制备方法以及该荧光分子探针在检测含巯基氨基酸方面的应用。 

背景技术

含有巯基的氨基酸和多肽在许多生理过程中扮演着重要的角色。例如，半胱氨酸(Cys)和同型半胱氨酸(Hcy)被认为与一些疾病紧密相关，如肾功能衰竭，老年痴呆症和帕金森氏病，动脉粥样硬化性血管疾病，以及冠状动脉心脏疾病。还原性谷胱甘肽(GSH)是主要的内源性抗氧化剂，被视为氧化应激能力的指示剂，生物体内巯基含量也可能受到一些氧化应激反应的影响。同时，利用巯基探针识别生物体释放出的硫醇可以用于间接检测相关生物酶以及评价相应抑制剂的活性。因此，寻求快速，灵敏选择性检测生物巯基越来越受到人们的重视(Giles NM.，Watts AB，Giles GI，Fry FH，Littlechild JA，Jacob C.Metal and redoxmodulation of cysteine protein function.[J]Chemistry & biology 2003；10(8)：677-693.Wang W，Rusin O，Xu X，Kim KK，Escobedo JO，Fakayode SO，Fletcher KA，Lowry M，Schowalter CM，Lawrence CM，Fronczek FR，Warner IM，Strongin RM.Detection of homocysteine and cysteine.[J]Journal of the American Chemical Society 2005；127(45)：15949-15958.Seshadri S，Beiser A，Selhub J，Jacques PF，Rosenberg IH，D’Agostino RB，Wilson PW，Wolf PA.Plasma homocysteineas a risk factor for dementia and Alzheimer′s disease.[J]New England Journal of Medicine 2002；346(7)：476-483.)。 

目前，已报道了一些分析方法来检测含巯基氨基酸，主要包括高效液相色谱，毛细管电泳，电化学检测，光分析和质谱鉴定技术。但这些方法都是限用于体外实验，不可以应用于在活体细胞中检测含巯基氨基酸。荧光探针可以有效的，专一的在活体细胞里成像，具有较好的灵敏性。因此，一些基于化学反应型的荧光探针已被报道，主要是利用迈克尔加成反应，与醛的环化反应，裂解反应等完成化学转化实现荧光检测含巯基氨基酸。(Zhu J，Dhimitruka I，Pei D.5-(2-Aminoethyl)dithio-2-nitrobenzoate as a more base-stable alternative to Ellman′sreagent.[J]Organic Letters 2004：6(21)：3809-3812.Hu M，Fan J，Li H，Song K，Wang S，Cheng G，Peng X.Fluorescent chemodosimeter for Cys/Hcy with a large absorption shift and imaging inliving cells.[J]Organic Biomolecular Chemistry 2011；9(4)：980-983.Long L，Lin W，Chen B，GaoW，Yuan L.Construction of a FRET-based ratiometric fluorescent thiol probe.[J]Chemical Communications 2011；47(3)：893-895.)。 

大多数已报道的荧光探针对含巯基氨基酸的响应只体现在荧光强度的改变。因此，研发一种兼具颜色变化和荧光增强的荧光探针对探讨含巯基氨基酸的生物学作用具有十分重要的意义。 

发明内容

对于上述情况，本发明的目的之一提供一种合成简便、反应条件温和、成本较低的荧光探针合成方法；目的之二是提供一种选择性好，灵敏度高，能够裸眼及荧光增强检测含巯基氨基酸的荧光探针。 

本发明使用的裸眼检测和荧光增强检测含巯基氨基酸荧光分子探针，采用二氟化硼-二吡咯甲烷醛衍生物和硝基甲烷在碱的作用下合成，硝基甲烷部分作为识别基团。