[发明专利]灯盏细辛制剂中四种有效成分含量同时检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种灯盏细辛制剂中绿原酸、咖啡酸、1,3-O-二咖啡酰奎宁酸、灯盏花乙素这四种有效成分含量同时检测的方法。

背景技术

灯盏细辛始载于《滇南本草》，习称灯盏花，因花似灯盏，根似细辛而得名。又名灯盏菊、细辛草、土细辛、地朝阳、双葵花、东菊、地顶草(云南)，为菊科植物短葶飞蓬(Erigeron breviscapus)的干燥全草，主产于云南、四川、贵州、广西、湖南、西藏等省区。灯盏细辛性味“甘、温、微苦、甘辛”，具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通经活络、止痛的功效。它作为治疗和预防心血管等疾病具有特殊疗效的植物药材，市场前景广阔，经济价值很高。《中国药典》1977年版曾予以收载，2005版又重新收载。自上世纪70年代起灯盏细辛制剂就已经开始用于临床。灯盏细辛液体制剂是以灯盏花为原料提取的含有酚酸类及黄酮类化合物等活性成分的浸膏，加入辅料配制而成的合剂、口服液、糖浆剂和滴眼剂。合剂、口服液、糖浆剂对治疗淤血证脑梗赛所致偏瘫、风湿痛、冠心病心绞痛、眼底视网膜静脉阻塞，血管炎性皮肤病等病症有良好的疗效。滴眼剂对治疗白内障等眼类疾病疗效独到。

以灯盏细辛合剂为代表的口服液制剂现已证实对于治疗缺血性脑血管疾病效果显著。灯盏细辛液体制剂相比其他灯盏花口服制剂，有口感适宜，分散度大，吸收快，能较迅速的发挥疗效，服用及携带方便等优点，最主要的还有，其原料采用的是灯盏花的提取液，尽可能的保留灯盏细辛的两大主要活性成分，即酚酸类和黄酮类化合物。这也是灯盏花液体制剂在疗效上比单纯以灯盏花素为原料的口服制剂有优势的地方。黄酮类以灯盏花素为代表，酚酸类包括咖啡酸、绿原酸、二咖啡酰基奎宁酸系列等，两大类成分的同时存在导致产品有比较显著的抗炎保肝、抗氧化、抗凝血、扩张脑血管、降低脑血管阻力，增加脑血流量、防治微循障碍、抗心肌梗塞，增加冠动脉流量等多种生物活性。

目前，灯盏细辛液体制剂系列产品的现行质量标准拟定均比较粗糙，例如灯盏细辛合剂的现行标准（标准号YBZ00612004-2010Z）：采用分光光度法测定总黄酮含量、液相色谱方法测定灯盏花乙素（又名野黄芩苷）含量、用灯盏细辛对照药材和咖啡酸对照品进行薄层色谱法鉴别。该标准重点控制黄酮类物质的质量情况，由于薄层色谱法方法本身仅能定性检测，无法定量检测，因此无法清楚了解酚酸类成分的质量情况，方法薄弱，可控性差。另外制剂中的重要活性成分如绿原酸、二咖啡酰基奎宁酸等也没有方法进行质量控制，因此，有必要对现有的质量标准的控制方法进行进一步的改进。

发明内容

本发明的目的是提供一种灯盏细辛液体制剂中四种有效成分含量同时检测的方法，能进一步清楚灯盏细辛液体制剂中的酚酸类和黄酮类这两大类重要的有效成分含量情况，利于产品的质量控制，保证产品工艺的稳定性，确保不同批次的产品临床效果一致。

本发明以绿原酸、咖啡酸、1,3-O-二咖啡酰奎宁酸、灯盏花乙素为指标成分，建立了采用高效液相色谱法同时测定灯盏细辛液体制剂中这四种化合物含量的方法。

具体检测方法如下：

1）对照品溶液的制备：取绿原酸、咖啡酸、1,3-O-二咖啡酰奎宁酸、灯盏花乙素对照品加甲醇溶解制成每ml含绿原酸2-60μg/ml、含咖啡酸3.1-93μg/ml、含1,3-O-二咖啡酰奎宁酸1.2-36μg/ml、含灯盏花乙素10-300μg/ml的对照品溶液，备用。

2）供试品溶液的制备：取1 mL或1g灯盏细辛制剂于10mL量瓶中，加入纯化水4ml，甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液；

3）4种有效成分含量测定：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10-20μL，注入液相色谱仪中，测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；

其中：液相色谱仪用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈或甲醇中的一种或几种为流动相A，0.05％-1.0%的甲酸或乙酸或磷酸中的一种或几种的水溶液为流动相B，按以下梯度洗脱：

时间0～10min，比例7％～9％A；

时间10～24min，比例8％～12％A；

时间24～37min，比例9％～16％A；

时间37～57min，比例10％～24％A；

时间57～60min，比例24％～7％A；

流速每分钟0.5-2mL；检测波长327nm；柱温30-40℃，绿原酸、咖啡酸、1,3-O-二咖啡酰奎宁酸、灯盏花乙素的理论塔板数不低于5000，与其他峰的分离度应大于1.5。