[发明专利]草乌活性成分的提取纯化工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种草乌活性成分的提取纯化工艺，特别是涉及用大孔树脂纯化草乌活性乌头碱的纯化工艺的方法。

背景技术

草乌为毛茛科多年生野生植物北乌头Aconitum kusnezoffii Reichb.的块根。性味辛、苦，热。有大毒。归心、肝、肾、脾经。能祛风除湿，温经止痛，用于风寒湿痹，关节疼痛，心腹冷痛，寒疝作痛，跌打损伤疼痛，有麻醉止痛的作用。草乌发挥药效的主要成分为其所含的总乌头碱，2010版药典规定用乌头碱、次乌头碱、新乌头碱控制生草乌的质量，此三种双酯型乌头碱为其活性成分及毒性成分。因生草乌毒性很大，难以制成直接给药制剂，2010版药典规定用苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱控制草乌的质量，此三种单酯型乌头碱为生草乌双酯型乌头碱的水解产物，毒性降低，可制成直接给药制剂。但在实际生产中由于双酯型乌头碱极易水解得到单酯型乌头碱，因此六种活性乌头碱往往同时存在，在以前的研究中，大都以总乌头碱衡量其纯度，不仅大孔树脂的纯化能力不高，使总乌头碱纯度不高，而且也没有以此六种活性成分的纯度进行衡量。

大孔树脂为有机高聚物吸附剂，能选择性的吸附有机物，近年来日益广泛地用于中药有效成分的提取分离。现在大孔树脂的种类很多，由于极性和粒径等性质的不同，其对不同物质的吸附与解吸附能力不同，为了提高产品质量，对不同物质应优选出大孔树脂分离纯化的工艺条件，为其新药研制奠定一定的基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高总乌头碱含量且同时含有草乌六种活性成分的提取纯化工艺。本发明的目的通过如下方案实现：

（1）取草乌药材，粉碎，用5-15倍体积量浓度为35%-95%乙醇超声提取10-60min或回流提取1-7h，过滤，回收乙醇，得草乌浸膏或浓缩液；

（2）将上述所得浸膏或浓缩液用乙醇溶解，上大孔树脂，药液按草乌总乌头碱计与干树脂的比例为2-10mg/1g，用水洗脱大孔树脂至无色，水洗脱液弃去；用25%-55%乙醇洗脱大孔树脂至无色，洗脱液弃去；用pH=2-10 的65%-95%乙醇洗脱大孔树脂，收集洗脱液，减压干燥，得草乌总乌头碱初提物。

（3）以上总乌头碱初提物浸膏用水溶解，调pH值范围为8-12，经萃取后得总乌头碱提取物。

步骤（1）中采用超声提取时，提取物以乌头碱、次乌头碱、新乌头碱为主的双酯型总乌头碱。

采用回流提取时，提取物以苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱为主的单酯型总乌头碱。

其中，步骤2中药液浓度优选1-8g生药/ml。

步骤2中上样速率和洗脱速率优选1-6BV/h。

步骤2中所用的大孔树脂型号可以为D101，AB-8，S-8，HPD-750，HPD-722，X-5或NKA-                                                。

步骤3中PH值优选8-12。

步骤3中萃取溶剂优选乙酸乙酯、氯仿、或乙酸乙酯氯仿混合溶剂、乙醚等低极性有机溶剂。

测定总乌头碱提取物含量的液相质谱联用条件为：

仪器：LC-10ATvp高效液相输液泵， 2010EV单重四极杆质谱仪（日本岛津公司）。

色谱柱型号：Venusil MP C18 色谱柱（150 mm×2.1 mm，1.7μm）（安吉尔公司）

柱温：室温

流动相：甲醇(A)；10mmol/L醋酸铵（B， 0.1%甲酸）

梯度洗脱程序：