[发明专利]一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种诊断疾病的试剂盒，具体地，涉及一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒。 

背景技术

系统性血管炎(systemic vasculitis)是一组以血管坏死和炎症为主要病理改变的疾病，常见的血管炎有魏格纳氏肉芽肿、显微镜下血管炎、肺出血-肾炎综合征和结节性多动脉炎等。这些疾病都有共同的特点：疾病累计全身各个部位的大小动脉和静脉，可因受累血管的类型、大小、部位、病程及病理改变导致复杂多变的临床表现；但他们都可检出特征性的抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibody, ANCA)，是系统性血管炎诊断重要依据。同时，ANCA常在疾病活动或复发前数周即出现浓度的快速升高，而当疾病缓解时，抗体水平迅速下降甚至消失，是检测病情、判断治疗效果、评价疾病转归的重要指标。 

ANCA是一种以中性粒细胞和单核细胞胞质成分为靶抗原的自身抗体，包括了大量的自身抗体，其中抗蛋白酶3（PR3）抗体和抗髓过氧化物酶（MPO）抗体具有明确的临床诊断意义，是最重要的ANCA抗体。本发明涵盖了最重要的ANCA抗体：PR3和MPO抗体，同时加入了肾小球基底膜抗体（GBM）——与血管炎相关的急进性肾小球肾炎的标志性抗体，能够更全面的诊断系统性血管炎。 

对于自身免疫疾病诊断方法多采用间接免疫荧光分析法（IFA）、酶联免疫吸附法〔ELISA)和免疫印迹，但各有其不足。间接免疫荧光分析法是检测自身抗体的常用技术。其实验基质为Hep-2细胞，含有完整的抗原谱，适合筛查试验。但是有如下缺点：不能作为确诊依据；结果的判断需要有丰富的经验；滴度的意义大于核型，但滴度的判定主观性强；灵敏度较低，特异性也不高。 

酶联免疫吸附法(ELISA)具有灵敏度高，可作为筛选实验，也可作为确诊依据，还可定量测定，检测病情和治疗效果。但一次试验只能检测单一指标，通量低，检测成本较高，在自身免疫疾病的诊断应用推广方面存在着极大的局限性。Western blot（WB）是在凝胶电泳和免疫分析技术基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性的优点，比较适合发现未知的抗体。而对于检测已知的抗体，由于使用了天然的混合抗原，实验过程中经常出现找不到目标条带和条带偏移的问题，给结果的判读造成了不少困难，极易误判和漏判。同时WB使用时间长，也不适合在临床检验中推广。有人将WB改进，直接将纯化抗原包被于硝酸纤维素膜上，然后进行免疫反应检测抗体，形成了改良的免疫印迹方法，但目前还没有将该方法用于检测血管炎的3种自身抗体的应用。 

对于现有的试剂盒，存在下述缺点： 

1、WB使用时间长，操作复杂。

2、WB使用了天然的混合抗原，实验过程中经常出现找不到目标条带和条带偏移的问题，给结果的判读造成了不少困难，极易误判和漏判。 

3、ELISA方法一次只能检测一个项目，效率不高。 

4、IFA方法仅能进行筛查，不具有辅助诊断的意义。 

5、目前还没有能同时检测血管炎相关的3种自身抗体的改良免疫印迹方法。 

6、目前的试剂盒中，一般没有对照线或者一个对照线只能作为一个检测结果对照，没有能够同时至少作为2个检测结果对照的质控带。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，该试剂盒的质控带可以同时对两个乃至更多的检测条带起到判读的作用。 

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，包括膜条，膜条由载片和依次固定在载片上的抗原条带、临界质控带、功能质控线构成，抗原条带由PR3、MPO和GBM中的至少两个彼此独立的划线到硝酸纤维素膜或尼龙膜上形成。