[发明专利]一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒

权利要求书

1.一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，包括膜条，其特征在于，膜条由载片和依次固定在载片上的抗原条带、临界质控带、功能质控线构成，抗原条带由PR3、MPO和GBM中的至少两个彼此独立的划线到硝酸纤维素膜或尼龙膜上形成。

2.根据权利要求1所述的一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，其特征在于，还包括酶标液、底物和浓缩洗涤孵育液。

3.根据权利要求1所述的一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，其特征在于，所述临界质控带的成分为50ng~25μg/mL的人IgG。

4.根据权利要求3所述的一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，其特征在于，所述临界质控带的成分为300ng~5μg/mL的人IgG。

5.根据权利要求1至4任一项所述的一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，其特征在于，所述临界质控带的临界质控值确定方法包括下述步骤：

1）选择m个确诊为阴性的新鲜血液标本作为样本，膜条的抗原条带中具有n个抗原，取膜条对每一个样本进行检测，扫描得到膜条中每一个抗原所检测抗体的灰度值，将m个样本中相同的抗原所检测抗体的灰度值作为一组数值得到n组数值，分别计算这n组数值的平均值M_p、标准差SD_p和各个抗原所检测抗体的临界质控值CO_p，其中CO_p=（M_p+2×SD_p），m、n、p均为自然数且m≥120，n≥2，n≥p≥1； 

2）将各个抗原所检测抗体的临界质控值CO_p进行处理，计算其平均值M、标准差SD、变异系数CV；

3）如CV≤10%，则可得到膜条的临界质控值CO，其中CO=（M+2×SD）；如CV＞10%，调整印迹抗原量重复步骤1）、步骤2）重新测定，直至CV≤10%；

4）选择确诊为阳性的新鲜血液标本作为样本，取膜条对每一个样本进行检测，扫描得到膜条中每一个抗原所检测抗体的灰度值，将其与膜条的临界质控值CO比较，如所有的样本灰度值均不小于CO，则CO有效；如有一个或以上的样本灰度值小于CO，需再次测定验证；如仍有一个或以上的样本灰度值小于CO，则调整印迹抗原量重复步骤1）、步骤2）、步骤3）重新确定膜条的临界质控值CO。

6.根据权利要求5所述的一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，其特征在于，根据确定的膜条的临界质控值确定临界质控带包被人IgG的浓度，具体方法为：将一定浓度的人IgG溶于Tris或Hepes缓冲液中，然后划线于硝酸纤维素膜上制备成成品膜条，且膜条上仅包被临界质控带；随机选取30个膜条检测步骤1）的随机阴性样本，并扫描灰度，计算30次测定的均值M_S、标准差SD_S和变异系数CV_S，其中CV_S=M_S/SD_S，临界质控带合格的标准为：1）0.97×CO ≤ M_S ≤ 1.03×CO；2）CV_S < 5%；如果不符合其中的任意一个，则需重新调整浓度重复本步骤所有实验，直至得到合格的临界质控带，此时的人IgG包被浓度即为临界质控带的包被浓度。

7.根据权利要求1至4任一项所述的一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，其特征在于，所述底物为质量百分比浓度为0.02%-2%的鲁米诺或质量百分比浓度为0.002%-0.2%的过氧化氢构成的单一试剂。

8.根据权利要求1至4任一项所述的一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，其特征在于，所述抗原条带相互平行并且每个抗原条带宽度均一，各相邻抗原条带之间间隔等宽。

9.根据权利要求1至4任一项所述的一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，其特征在于，所述血管炎疾病包括魏格纳氏肉芽肿、显微镜下血管炎、肺出血-肾炎综合征、急进性肾小球肾炎和结节性多动脉炎。

10.根据权利要求1至4任一项所述的一种检测血管炎相关自身抗体谱的试剂盒，其特征在于，所述PR3、MPO和GBM是由昆虫细胞sf9表达并纯化制得。