[发明专利]一种丹参酮IIA磺酸钠原料药中杂质的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种从丹参酮IIA磺酸钠原料药中分离纯化其中三种主要杂质的方法。

背景技术

丹参酮IIA磺酸钠（Sodium Tanshinone II A Sulfonate，Phenanthro[1，2-b]furan-2-sulfonicacid,6,7,8,9,10,11-hexahydro-1,6,6-trimethyl-10,11-dioxo-,sodiumsalt）具有活血化瘀、抑制血小板聚集、降低血液黏滞度、扩张小动脉、改善全身微循环、清除氧自由基、改善组织缺氧、抗炎等作用，目前已广泛应用于心脑血管疾病以及其他系统疾病的治疗。1,2-脱氢丹参酮IIA磺酸钠，丹参酮IIB磺酸钠和1-羟基丹参酮IIA磺酸钠是丹参酮IIA磺酸钠原料药中的三种主要杂质，它们的结构式分别为：

对于丹参酮IIA磺酸钠原料药中杂质的相关研究意义重大(李军等，丹参酮ⅡA磺酸钠有关物质和含量测定方法研究，中南药学.2006，4（4）：291)。在对丹参酮IIA磺酸钠原料药进行质量研究时，需要使用相关杂质的对照品对原料药中的杂质进行含量监控，以确保制备得到符合药用要求，能够用于制备安全有效的药物制剂的原料药。

目前，国内外多采用制备型高效液相色谱与常压或中压柱色谱相结合分离纯化丹参酮IIA磺酸钠原料药中的相关杂质，这类方法操作繁琐耗时，有机溶剂消耗量巨大，且样品在柱色谱分离后需要经过浓缩后再转移到制备型高效液相色谱，不可避免会造成样品的损失和污染（Wang B,et al.Isolation and structurecharacterization of related impurities in Sodium Tanshinone IIA Sulfonate by LC/ESI-MSn andNMR,J Pharm Biom Anal.2012,36:67;Zou Q,et al.Identification,Isolation,andCharacterization of Impurities in Sodium Tanshinone IIA Sulfonate,J Liq Chrom Rel Tech.2009,32:2346）。因此，如果可以不经过传统柱层析过程而直接通过制备型高效液相色谱技术对杂质进行分离制备，则可以有效的克服上述局限。然而，由于原料药中主药与杂质含量相差过大，当主药量已经超载时杂质的含量却极其低微，无法直接用于制备型高效液相色谱，而且制备型高效液相色谱所用固定相对样品有不可逆性吸附作用。

高速逆流色谱（High-speed counter-current chromatography，HSCCC）是一种较新的液液分配色谱技术，它不用任何固体支撑体或载体而克服了传统分离方法对样品的不可逆性吸附作用，因而样品回收率高，同时还具有应用范围广、仪器操作简单、分离量大等优点，但目前国内外还未见有将高速逆流色谱应用于丹参酮IIA磺酸钠原料药中相关杂质的分离纯化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备工艺简单快速、回收率高、纯度高且适于对照品研究的从丹参酮IIA磺酸钠原料药中分离纯化三种主要杂质—1,2-脱氢丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIB磺酸钠和1-羟基丹参酮IIA磺酸钠的方法。

本发明提供了一种丹参酮IIA磺酸钠原料药中杂质的分离纯化方法，是用高速逆流色谱从丹参酮IIA磺酸钠原料药中分离纯化三种主要杂质-1,2-脱氢丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIB磺酸钠和1-羟基丹参酮IIA磺酸钠，所述的高速逆流色谱的条件为以三氯甲烷、正丁醇、甲醇和0.5%饱和醋酸铵水溶液配制构成固定相、流动相的溶剂体系，在分液漏斗中充分振摇后静止分层，上相为固定相，下相为流动相，先使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使主机转动，再泵入流动相，将丹参酮IIA磺酸钠原料药溶于少量下相中,由进样阀进样，根据检测器谱图接收流分“Ⅰ”、“Ⅱ”、“Ⅲ”，流分“Ⅰ”为1,2-脱氢丹参酮IIA磺酸钠，流分“Ⅱ”为丹参酮IIB磺酸钠，流分“Ⅲ”为1-羟基丹参酮IIA磺酸钠。

所述的溶剂体系中，三氯甲烷、正丁醇、甲醇和0.5%饱和醋酸铵水溶液的用量体积比为16~18︰0.2~0.4︰13~15︰8~10。

优选的，所述的溶剂体系中三氯甲烷、正丁醇、甲醇和0.5%饱和醋酸铵水溶液的用量体积比为17︰0.3︰14︰9。

本发明的方法具体步骤如下：