[发明专利]一种高纯度他克莫司的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于工业微生物技术领域，涉及药品原料的制备方法，具体涉及到一种从发酵菌丝体中分离纯化他克莫司的制备方法。

背景技术

他克莫司（tacrolimus），又名FK506，是一种从筑波链霉菌（Streptomyces tsukubaensis）产生的23元环的大环内酯类的免疫抑制剂，分子式为C₄₄H₆₉NO₁₂，分子量为804.02，结构式如下：

他克莫司为白色结晶，熔点127～129℃，旋光度-84.4°(c=1.02，三氯甲烷)。溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿或乙醚，难溶于己烷或石油醚，不溶于水。

他克莫司具有抑制抗体的产生和移植物的排斥作用及白细胞介素IL-2、IL-3和干扰素IFN-r的产生（海峡药学，2010，22(11)：148～150）。他克莫司的免疫抑制作用比环孢素A(CsA)强50～100倍（中华器官移植杂志，2000，21(4)：245～247），因而大大降低了临床使用剂量，可降低原治疗费用1/3～1/2，同时不良反应也明显降低，用于心脏、肺脏移植有很好效果。

美国专利US2006142565报道了一种纯化他克莫司的方法，该方法将他克莫司的提取液通过XAD1180树脂三次纯化后，收集他克莫司纯度高的部分，用乙酸乙酯萃取后浓缩，加入乙酸乙酯、环己烷和水进行结晶，并重复结晶2～3次，得到HPLC纯度为99.84%的他克莫司产品，收率仅为32.6%。该方法步骤繁琐，需用树脂进行3次纯化后，再用溶剂结晶2～3次，收率很低。

Lee等（Lee S Y, et al. J Microbinl.Bintechnol. 1997，7，278～281）报道了他克莫司发酵液用二氯甲烷萃取，萃取液浓缩后再用乙酸乙酯结晶。该方法的缺点是萃取剂二氯甲烷不但毒性大，而且沸点低，萃取剂回收率低，造成生产成本较高。Arai（ ARAI M.. J. Antibint. Ser.A 1959，13，46～56）描述了一种他克莫司的制备方法，用丙酮萃取发酵液后将萃取液浓缩，得到他克莫司的粗晶体，然后再用甲醇对他克莫司的粗晶体的溶液结晶。该方法的缺点是他克莫司在甲醇溶液中非常容易生成11,11’-二甲氧基他克莫司，造成结晶收率低，杂质含量高。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种高纯度的他克莫司的制备工艺，该方法工艺简单、质量可靠，收率高，适于工业化规模生产药用级他克莫司原料的生产。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种高纯度他克莫司的制备方法，包括以下步骤

1）用体积百分浓度为80～95%的极性溶液对他克莫司发酵液分离所得的菌丝体进行浸泡，然后再对浸泡液进行固液分离得到他克莫司浸提液，

2）再将此他克莫司浸提液用水稀释至极性溶液体积百分浓度为25%～40%，然后将稀释后的浸提液通过大孔脱色树脂柱进行脱色处理，得他克莫司脱色液；

3）将他克莫司脱色液导入大孔吸附树脂柱进行吸附，然后用极性溶剂与水的混合溶液对大孔吸附树脂柱进行梯度解吸，得到他克莫司一次解吸液；

4）浓缩一次解吸液，并用乙酸乙酯或者乙酸丁酯萃取，然后分液并浓缩乙酸乙酯相或者乙酸丁酯相，得到他克莫司粗提物；

5）将他克莫司粗提物用极性溶剂溶解，注入纳米聚合物微球层析柱；

6）使用极性溶剂与水的混合液对纳米聚合物微球层析柱进行梯度解吸，并分段收集他克莫司解吸液，将浓度大于98.5%的他克莫司解吸液合并，得他克莫司二次解吸液；

7）将上述二次解吸液浓缩并加入有机溶剂结晶，然后固液分离干燥后即得到他克莫司精粉。

本发明的进一步改进在于：所述步骤1）的浸泡过程中每千克菌丝体加入2～4升85～95%的极性溶液。

本发明的进一步改进在于：所述步骤2）脱色处理中所使用的大孔脱色树脂柱为LX-900或者LSA-700大孔脱色树脂柱；所述步骤3）中大孔吸附树脂柱为XF-800或者D101大孔吸附树脂柱。

本发明的进一步改进在于：所述步骤3）中对大孔吸附树脂柱进行梯度解吸所使用的极性溶剂和水的混合溶液的体积百分浓度分别为40～50%和80%～90%

本发明的进一步改进在于：所述步骤6）中对纳米聚合物微球层析柱进行梯度解吸所使用的极性溶剂和水的混合溶液的体积百分浓度分别为45～55%和80%～85%。