[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及其在抗曲霉菌中的应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌21-1-2(Bacillus subtilis21-1-2)，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌21-1-2对黄曲霉菌具有拮抗作用，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M2012217。

2.一种从土壤中筛选对黄曲霉菌具有拮抗作用的枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.细菌分离；

b.曲霉的培养及孢子液的制备；

c.抗曲霉菌株的筛选；

d.抗曲霉菌株的复筛。

3.根据权利要求2所述枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤a进一步包括：称取土壤样品5～10g，加入50～100ml无菌生理盐水，涡旋混匀1～3min，制成体积比为1∶10的悬液，分别用微量移液器吸取100～200μl，涂布LB平板，37℃培养24～36h，挑取单菌落纯化。

4.根据权利要求2所述枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤b进一步包括：将产毒黄曲霉菌和无毒黄曲霉菌接种到PDA斜面，28℃培养6d，待孢子充分形成后，每个试管中加入4～8ml已灭菌的0.9％生理盐水，震荡后用血球计数板计数，并调至100～110/ml，4℃保存。

5.根据权利要求2所述枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤c进一步包括：移液枪取100μl步骤b制备好的孢子液于PDA平板上，涂布器将孢子液涂干；将步骤a分离纯化得到的菌株点种到平板上，每个菌株做两个平行样，28℃培养48h后观察试验菌株周围是否存在抑菌圈。

6.根据权利要求2所述枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤d进一步包括：用接种环取步骤c初筛过程中选出的有抑菌活性的菌株一环，接于LB液体培养基中37℃，190r/min发酵24～26h，8000r/min离心10～20min，用一次性滤器过滤滤除菌体；移液枪取100μl制备好的孢子液于PDA平板上，用涂布器将孢子液涂干，每个板上放置三个牛津杯，分别用移液枪加入100μl、200μl滤液，100μl生理盐水作为对照，置于28℃恒温培养箱中培养48h，观察试验菌株周围是否有抑菌圈并用十字测量法测定抑菌圈直径。