[发明专利]检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒，其特征在于包括酶标板96孔、齐帕特罗标准品工作液、齐帕特罗抗体工作液、齐帕特罗酶标二抗工作液、底物液、终止液、浓缩洗涤液和浓缩样品稀释液；

其中，所述酶标板是包被齐帕特罗抗原的酶标板，齐帕特罗抗原是用0.05 mol/L  pH 9.6的碳酸盐包被缓冲液稀释成1:8000比例，100 μL/孔，37℃，2h，取出4℃放置过夜；取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液300 μL/孔，洗板3次，1min/次；然后加入0.5% BSA封闭，150 μL/孔，37℃放置2h；取出酶标板甩掉板内液体，用洁净的毛巾包裹后拍干板内残留液体；将拍干后的酶标板整齐地摆放置GMP车间恒温25℃晾干；抽检要求板内孔与孔之间，板间的OD值变异系数均小于10%；检验合格后将酶标板密封后置4℃下保存；

其中，所述齐帕特罗标准品的浓度分别为0 ng/mL、0.1 ng/mL、0.3 ng/mL、0.9 ng/mL、2.7 ng/mL、8.1 ng/mL；

其中，所述齐帕特罗抗体工作液是用抗体稀释液稀释成1:10000比例；

所述齐帕特罗酶标二抗工作液是用酶标二抗稀释液稀释成1:2000比例；

所述底物液包含0.05 mol/L的NaHPO₄·12H₂O、0.025 mol/L的一水柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)、0.2 mmol/L的3,3,5,5-四甲基联苯胺-、0.5 mmol/L的过氧化氢脲和5%的N,N-二甲基甲酰胺；

所述终止液是2 mol/L的硫酸(H₂SO₄)；

所述浓缩洗涤液是20倍浓缩洗涤液，其包含0.05%吐温-20，0.01 mol/L的PBST，pH值范围7.0-7.5之间；

所述浓缩样品稀释液是2倍浓缩稀释液，其成分为0.01 mol/L，pH7.4磷酸盐PBS缓冲液。

2.权利要求1所述检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒的使用方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)预处理待测样品，即将待测试的样品处理为液体样品，或者用有机溶剂提取待测样品，氮气吹干并将其复溶于样品稀释液工作液中；

(2)将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温20～25℃平衡30 min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀；

(3)取包被齐帕特罗抗原的酶标板，加标准品/样本50 μL/孔到对应的微孔中；

(4)加入齐帕特罗抗体工作液，50 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30 min；

(5)小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250 μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10 s，用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破；

(6)加入齐帕特罗酶标二抗100 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30 min，取出重复洗板步骤（5）；

(7)加入底物液100 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20 min；

(8)加入终止液50 μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450 nm处或双波长450/630 nm检测，测定每孔吸光度值，在5min内读完数据；

(9)以标准品测试的吸光度值与标准品的浓度对数值绘制标准曲线，对照标准曲线计算样品中齐帕特罗的含量。

3.根据权利要求2所述检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒的使用方法，其特征在于其中在步骤(3)中，齐帕特罗标准品和处理好的样品同时添加到对应微孔中。

4.根据权利要求2所述检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒的使用方法，其特征在于其中所述处理后的样品是经过以下处理的样品：

尿样取待检尿样，若样品比较混浊时，可5000 r/min以上，离心5 min或过滤。

5.根据权利要求2所述检测残留齐帕特罗的酶联免疫试剂盒的使用方法，其特征在于其中所述处理后的样品是经过以下处理的样品：

血清取待检血清样，若样品比较混浊时，可5000 r/min以上，离心5 min或过滤。