[发明专利]β-1,3-葡聚糖识别蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.天然β-1，3-葡聚糖识别蛋白，其特征在于，它包括(1)氨基酸序列如附图2-(A)所示，(2)编码的基因序列如附图2-(B)所示。

2.根据权利要求1所述的β-1，3-葡聚糖识别蛋白，其特征在于，所述的β-1，3-葡聚糖识别蛋白来源于鳞翅目(Lepidoptera)、天(大)蚕蛾科(Saturniidae)昆虫，选自柞蚕、蓖麻蚕、天蚕、印度柞蚕、琥珀蚕、美国柞蚕、樗蚕、大山蚕、美洲天蚕、樟蚕、枫蚕，所述的昆虫为任何地域的天然或人工放养或人工饲养的昆虫。

3.β-1，3-葡聚糖识别蛋白衍生物或类似物或活性片段，其特征在于它包含权利要求1所述的氨基酸序列全序、片段，包括Met-β-1，3-葡聚糖识别蛋白、Met-组氨酸标签-β-1，3-葡聚糖识别蛋白、Met-β-1，3-葡聚糖识别蛋白-组氨酸标签、Met-GST标签-β-1，3-葡聚糖识别蛋白、Met-β-1，3-葡聚糖识别蛋白-GST标签；β-1，3-葡聚糖识别蛋白全长肽链、Met-组氨酸标签-β-1，3-葡聚糖识别蛋白全长肽链、Met-β-1，3-葡聚糖识别蛋白全长肽链-组氨酸标签、Met-GST标签-凝血酶酶切位点-β-1，3-葡聚糖识别蛋白全长肽链、Met-β-1，3-葡聚糖识别蛋白全长肽链-凝血酶酶切位点-GST标签等，如附图3所示。

4.重组β-1，3-葡聚糖识别蛋白及其衍生物、类似物、活性片段以及重组β-1，3-葡聚糖识别蛋白-b，其特征在于，表达产物具有β-1，3-葡聚糖识别蛋白的生物学活性。

5.如权利要求1所述的β-1，3-葡聚糖识别蛋白的生产方法，其特征在于，利用鳞翅目天蚕蛾科昆虫的血淋巴，既昆虫血液(或血细胞裂解物)和淋巴液的混合物或/和昆虫压榨或匀浆的体液作为分离纯化的原料液，原料液经过单独的离子交换层析或疏水层析或亲和层析或凝胶过滤或盐析或超滤分离纯化β-1，3-葡聚糖识别蛋白活性组分，或通过离子交换层析、疏水层析、亲和层析、凝胶过滤、盐析或超滤分离纯化方法中的两个或多个的组合以及其分离纯化方法顺序的重排组合获得电泳纯乃至HPLC纯度的β-1，3-葡聚糖识别蛋白，其提取、分离、纯化体系中：1.操作温度在0℃-45℃，优选0℃-10℃；2.溶液的酸碱度在pH2-pH12，优选pH4-pH10；3.调节溶液酸碱度的化学试剂是常规、通用的酸或碱及其溶液，酸及其溶液优选HCl、HAc、磷酸、柠檬酸、硫酸、硼酸，碱及其溶液优选NaOH、KOH、Tris、柠檬酸钠或钾盐、磷酸钠或钾盐、硼砂；4.缓冲液是常规、通用缓冲离子对缓冲液，优选柠檬酸根缓冲离子对、HCl-Tris缓冲离子对、柠檬酸根-磷酸根缓冲离子对、磷酸根缓冲离子对、醋酸根缓冲离子对、硼酸根缓冲离子对、硼酸-Tris缓冲离子对、上述各缓冲离子的组合；5.溶液或缓冲液的离子强度在0.001mol/L-0.5mol/L，优选0.01mol/L-0.1mol/L。

6.如权利要求1所述的β-1，3-葡聚糖识别蛋白或权利要求3所述的β-1，3-葡聚糖识别蛋白衍生物或类似物或活性片段或权利要求4所述β-1，3-葡聚糖识别蛋白-b的基因表达生产方法，其特征在于，它包括(1)利用基因工程技术表达β-1，3-葡聚糖识别蛋白、β-1，3-葡聚糖识别蛋白衍生物或类似物或活性片段、β-1，3葡聚糖识别蛋白-b，(2)从上述表达体系中分离纯化重组的β-1，3-葡聚糖识别蛋白、重组的β-1，3-葡聚糖识别蛋白衍生物或类似物或活性片段、重组β-1，3-葡聚糖识别蛋白-b，(3)上述表达产物经过单独的离子交换层析或疏水层析或亲和层析或凝胶过滤或盐析或超滤分离纯化重组β-1，3-葡聚糖识别蛋白、重组β-1，3-葡聚糖识别蛋白衍生物或类似物或活性片段、重组β-1，3-葡聚糖识别蛋白-b活性组分，(4)上述表达产物通过离子交换层析或疏水层析或亲和层析或凝胶过滤或盐析或超滤分离纯化方法中两个或几个分离纯化方法的组合以及其分离纯化方法顺序的重排组合获得电泳纯乃至HPLC纯度的重组β-1，3-葡聚糖识别蛋白、重组β-1，3-葡聚糖识别蛋白衍生物或类似物或活性片段、重组β-1，3-葡聚糖识别蛋白-b。