[发明专利]小分子干扰核糖核酸的壳聚糖纳米粒传递系统及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体为一种用于治疗鼻咽癌的经鼻给药小核酸纳米载体递药系统的制备方法。

背景技术

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国常见的恶性肿瘤之一,占头颈部肿瘤发病率首位。好发于两广、福建及嘉陵江流域,近年来发病率有逐年升高的趋势。放射治疗是鼻咽癌的基本治疗手段,可以取得较高的局部控制率,但由于鼻咽癌生长迅速以及高转移性,使该病存在着较高的治疗失败率,主要原因是局部区域复发和远处转移。是否能够将基因治疗应用于鼻咽癌，是人们十分关注的问题。

小干扰RNA(siRNA)由21～23个碱基对构成,可在细胞质中特异性结合与其碱基对互补的信使RNA(mRNA),经核酸酶降解mRNA而阻断其编码蛋白质的表达,即通过RNA干扰(RNAi)实现基因沉默。该过程既可沉默细胞内有害基因,又可沉默外来病毒基因,因此,siRNA作为药物在癌症和流感、肝炎等病毒感染疾病治疗领域有重要科学意义和应用价值。但是,亲水性阴离子siRNA易被快速从血液循环中清除,难以跨越表面负电的疏水性细胞膜,易被核酸酶降解,需要安全高效的载体释放系统保护并高效运送进入细胞发挥功能。

目前siRNA的非病毒载体主要为阳离子脂质体和阳离子高分子,如聚乙烯亚胺(PEI)和壳聚糖。尽管脂质体易与细胞膜融合,但不稳定且有较强细胞和体内毒性;PEI质子缓冲能力利于胞内转运,但也有较强的细胞和体内毒性。

壳聚糖(Chitosan,CS)是一种从虾皮、蟹壳中提取出来的天然高分子多糖,壳聚糖作为天然阳离子多糖,分子链上氨基质子化后易黏附并跨越表面负电的疏水性细胞膜,已被证明具有良好的生物相容性、生物可降解性和低/无毒性,因而CS是一种极具发展前景的基因载体材料。

文献：HOWARD KA,RAH BEK UL,L IU X,et al.RNA in terference in vi tro and in vivo using a ch itosan/s iRNA n anopart icle system[J].MolTher,2006,14(4):476-484.报导，Howard等制备了siRNA壳聚糖纳米粒，在体外通过荧光显微镜观察到在1h内siRNA壳聚糖纳米粒被小鼠胚胎成纤维细胞NIH 3T3细胞摄取,人肺癌细胞H 1299和鼠腹膜巨噬细胞检测结果显示,4h后由纳米粒介导的基因沉默所引起的绿色荧光蛋白(GFP)表达分别减少77.9%和90%,而市售转染剂TransIT2TKO作用24h才能达到类似效果。原因可能是小粒径(180~330nm)和多余的正电荷有利于纳米粒与细胞膜的相互作用。

鼻腔给药试验表明，与错排siRNA的对照组和空白组相比,转基因小鼠细支气管上皮细胞EGFP表达分别降低37%和43%。

目前siRNA的壳聚糖纳米粒传递系统研究很多，但是大部分都是基于静脉注射给药的传递系统，不适用于鼻咽部位给药。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小分子干扰核糖核酸壳聚糖纳米粒传递系统及制备方法，以克服现有技术存在的缺陷，满足临床应用的需要。

所述的小分子干扰核糖核酸壳聚糖纳米粒传递系统，以壳聚糖为传递主体，以所述传递系统的总重量为基准，含有0.5~2.0%的小分子干扰核糖核酸和10%～25%的多聚磷酸钠；

优选的，所述的小分子干扰核糖核酸壳聚糖纳米粒传递系统，以壳聚糖为传递主体，含有1.0～1.5%的小分子干扰核糖核酸和12%～18%的多聚磷酸钠；

优选的，所述的小分子干扰核糖核酸壳聚糖纳米粒传递系统，还包括载体，所述载体选自环糊精衍生物或海藻糖中的一种以上；其中环糊精衍生物具有促进纳米粒鼻粘膜吸收的作用，海藻糖具有冻干时保护纳米粒作用；

所述纳米粒冻干前后粒径为60~200nm，Zeta电势10～70mV；

优选的，冻干前后粒径为80~150nm，Zeta电势20～40mV。

所述载体与壳聚糖、小分子干扰核糖核酸和多聚磷酸钠总重量之比为

载体∶总重量=20～100∶1；

优选的为：

载体∶总重量=50～70∶1；

优选的，所述载体为环糊精衍生物和海藻糖的混合物，重量比为：

环糊精衍生物∶海藻糖=1～3.5∶1；