[发明专利]一种鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白，其特征在于：包括连接在一起的嗜水气单胞菌II型孔蛋白膜外部分和迟钝爱德华氏菌ompS2膜外部分，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO1的第271~544位和第1~257位所示。

2.如权利要求1所述的一种鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白，其特征在于：所述嗜水气单胞菌II型孔蛋白膜外部分和迟钝爱德华氏菌ompS2膜外部分通过一段连接肽连接在一起，该连接肽的序列如SEQ IDNO1的第258~270位所示。

3.一种编码权利要求1所述的鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白的基因序列，其特征在于：包括连接在一起的嗜水气单胞菌II型孔蛋白膜外部分的编码核苷酸序列和迟钝爱德华氏菌ompS2膜外部分的编码核苷酸序列，上述编码核苷酸序列分别如SEQ ID NO2的第831~1612位和第1~771位所示。

4.如权利要求3所述的一种编码鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白的基因序列，其特征在于：所述嗜水气单胞菌II型孔蛋白膜外部分的基因序列和迟钝爱德华氏菌ompS2膜外部分的基因序列通过一段如SEQ ID NO2的第772~810位所示的编码一段连接肽的核苷酸序列连接起来。

5.一种表达权利要求1所述的鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白的质粒，其特征在于：包括负载有SEQ ID NO2所示核苷酸序列的原核表达载体。

6.如权利要求5所述的一种表达鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白的质粒，其特征在于：所述原核表达载体为融合表达载体。

7.一种表达权利要求1所述的鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白的大肠杆菌，其特征在于：所述大肠杆菌转化有负载SEQ ID NO2所示核苷酸序列的原核表达载体。

8.如权利要求6所述的一种表达鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白的大肠杆菌，其特征在于：所述原核表达载体为融合表达载体。

9.如权利要求7或8所述的一种表达鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白的大肠杆菌，其特征在于：所述用于表达的大肠杆菌为大肠杆菌BL21或大肠杆菌DH5α。

10.一种权利要求1所述的鳗鲡嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌二联重组蛋白的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）分别扩增编码嗜水气单胞菌II型孔蛋白膜外部分和迟钝爱德华氏菌ompS2膜外部分的基因序列，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO1的第271~544位和第1~257位所示，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO2的第831~1612位和第1~771位所示；

（2）将步骤（1）所得的两个基因序列连接在一起，得到融合基因序列；

（3）将步骤（2）所得的融合基因序列连接到原核表达载体中，构建重组表达载体；

（4）将步骤（3）中所构建的重组表达载体转化到原核宿主细胞中，并在适于表达所述融合基因的条件下培养被转化的原核宿主细胞；

（5）回收并纯化所培养的原核宿主细胞表达的融合蛋白；

（6）对步骤（5）所得的融合蛋白进行复性。