[发明专利]促血管生成素1基因修饰的间充质干细胞、及其构建方法与应用无效
申请号: | 201210431720.4 | 申请日: | 2012-11-01 |
公开(公告)号: | CN102899293A | 公开(公告)日: | 2013-01-30 |
发明(设计)人: | 徐金富;瞿介明 | 申请(专利权)人: | 上海市肺科医院 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/867;A61K48/00;A61P11/00;A61L27/38 |
代理公司: | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人: | 刘懿 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 血管 生成 基因 修饰 间充质 干细胞 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种促血管生成素1基因修饰的间充质干细胞,其特征在于,是携带有促血管生成素1基因的间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的促血管生成素1基因修饰的间充质干细胞,其特征在于,所述促血管生成素1基因来源于pCR2.1-Ang1质粒。
3.根据权利要求1所述的促血管生成素1基因修饰的间充质干细胞,其特征在于,所述间充质干细胞来源于哺乳动物。
4.一种构建权利要求1所述的促血管生成素1基因修饰的间充质干细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)将促血管生成素1基因导入慢病毒包装系统中的目的基因转移载体中,得到携带有促血管生成素1基因的重组慢病毒载体;
2)将携带有促血管生成素1基因的重组慢病毒载体与慢病毒包装系统中的包装质粒和包膜质粒(16-24): (5.7-11.7): (5.5-10.5)的重量份数比混合,转染慢病毒包装细胞,得到携带有促血管生成素1基因的重组慢病毒;
3)将携带有促血管生成素1基因的重组慢病毒转染间充质干细胞,得到过表达促血管生成素1的促血管生成素1基因修饰的间充质干细胞。
5.根据权利要求4所述的构建方法,其特征在于,所述间充质干细胞从哺乳动物中分离纯化得到。
6.根据权利要求4所述的构建方法,其特征在于,所述促血管生成素1基因来源于pCR2.1-Ang1质粒。
7.根据权利要求4所述的构建方法,其特征在于,所述步骤1)中的慢病毒包装系统中的目的基因转移载体为pLV质粒,pLV质粒中含有Ubiqutin 启动子。
8.根据权利要求4所述的构建方法,其特征在于,所述步骤2)包装质粒为pCMV-dR8.74质粒,包膜质粒为pMD2G质粒,慢病毒包装细胞为293T细胞。
9.根据权利要求4所述的构建方法,其特征在于,所述步骤2)中的转染慢病毒包装细胞采用磷酸钙法、DEAE-葡聚糖法或人工脂质体法。
10.权利要求1至3中任何一项所述的促血管生成素1基因修饰的间充质干细胞在制备修复肺损伤药物或材料中的应用。
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