[发明专利]乙酰化过低和过高的脑膜炎球菌荚膜糖

说明书

本申请是2004年10月4日提交的CN200480034525.1，题为“乙酰化过低和过高的脑膜炎球菌荚膜糖”的分案申请。

本文引用的所有文献全文纳入作为参考。

技术领域

本发明涉及脑膜炎球菌荚膜糖及其偶联衍生物的领域。

背景技术

多糖是重要的生物分子，它们广泛地应用于预防和治疗疾病的制药工业。例如，荚膜多糖在抗带荚膜的细菌，如脑膜炎球菌(脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis))、肺炎球菌(肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae))和Hib(B型流感嗜血菌(Haemophilus infiuenzae))的疫苗中使用多年。

为增强荚膜多糖，特别是在儿童中的免疫原性，开发了偶联疫苗。这些疫苗含有与载体蛋白偶联的荚膜糖[例如，参考文献1-3]。偶联将不依赖于T的抗原转变为依赖于T的抗原。

脑膜炎奈瑟球菌血清群W135(“MenW135”)的荚膜糖含有唾液酸-半乳糖二糖单位的聚合物：

→4)-D-Neup5Ac(7/9OAc)-α-(2→6)-D-Gal-α-(1→

其中“Neu”指通常称为唾液酸的神经氨酸。

类似地，脑膜炎奈瑟球菌血清群Y(MenY)的荚膜糖含有唾液酸-葡萄糖二糖单位的聚合物：

→4)-D-Neup5Ac(7/9OAc)-α-(2→6)-D-Glc-α-(1→

实质上，这些荚膜糖在一些唾液酸残基的一些7和9位发现是O-乙酰化的。W135糖的O-乙酰化在参考文献4中“首次报道”，该文献报道了在O-7和O-9位的O-乙酰化。虽然作者注意到以前的工作表明O-乙酰化在O-7、O'-3或O'-4位发生，但血清群Y糖的O-7和O-9位也观察到乙酰化。参考文献5报道了糖的O-乙酰基含量的进一步研究。

参考文献5报道就血清群W135而言，“有越来越多的证据显示O-乙酰化在引发保护性抗体应答中不重要”。相反，参考文献6报道“有证据表明O-乙酰化影响多糖疫苗的免疫原性”。假定“CPS[荚膜多糖]的O-乙酰化在引发保护性免疫力中不重要”，然而参考文献5的作者研究了血清群W135和Y的乙酰化。他们的研究结果表明这两种血清群于室温在碱性条件下保存9天后O-乙酰化无变化。

参考文献7报道于四价多糖疫苗中的“W135和Y菌株的O-乙酰化状态”以前“未报道”。作者在参考文献8中继续报道“关于血清群W135和Y的O-乙酰化状态知之甚少”，并且他们说进一步的工作“可增进对最优化疫苗制剂的了解”，然而这种进一步工作的本质和可能的了解并未详细描述。参考文献9报道血清群W135的“O-乙酰化与疫苗开发的关联性尚未确定”。参考文献6同意“O-乙酰化对血清群W-135或Y多糖的免疫原性的影响尚未获得”的论据(2004年1月)。

对血清群W135和Y的这种误解和信息的缺乏与当前用作糖疫苗的两种其它血清群完全不同。脑膜炎奈瑟球菌血清群C荚膜多糖的O-乙酰化差异已广泛报道[10、11]，但似乎对免疫原性无任何负面影响，因为Menjugate^TM和NeisVac-C^TM产品均是有效的。相反，血清群A多糖的脱-O-乙酰化与“免疫原性的显著降低”有关[12]。

本发明的目标是提供用于生产免疫原性组合物，特别是当偶联于载体蛋白和脑膜炎血清群W135和Y时的荚膜糖衍生物。

发明内容

尽管O-乙酰化在脑膜炎球菌血清群W135和Y疫苗中的作用不确定，本发明人发现O-乙酰化实际上是有关的，特别是在制备偶联疫苗期间。本发明是基于以下发现：来源于MenW135和MenY并改变唾液酸残基7和9位的O-乙酰化水平的修饰荚膜糖可用于制造免疫原性组合物。相对于未修饰的天然糖，本发明的衍生物在与载体蛋白偶联期间择优选择。此外，与天然多糖相比，这些衍生物的偶联物显示提高了免疫原性。

修饰的糖

因此，本发明提供修饰的血清群W135脑膜炎球菌荚膜糖，其中：(a)糖中≤x％的唾液酸残基在7位是O-乙酰化的；和/或(b)糖中≥y％的唾液酸残基在9位是O-乙酰化的。

类似地，本发明提供修饰的血清群Y脑膜炎球菌荚膜糖，其中：(a)糖中≤x％的唾液酸残基在7-位是O-乙酰化的；和/或(b)糖中≥y％或≤z％的唾液酸残基在9位是O-乙酰化的。