[发明专利]一种快速检测转基因水稻品系TT51-1的方法

权利要求书

1.一种用于检测转基因水稻TT51-1的特异性引物，其特征在于，由外引物正向序列：5’-AATGACCGCTGTTATGCG-3’；外引物反向序列：5’-TTTTGGAACATATGAGTGGTAG-3’；内引物正向序列：5’-CCTCTAGAGTCGACCTGCAGCCATTGATTTGTAGAGAGAGAC-3’；内引物反向序列：5’-CGAGTGCTGGGGCAGATAAGCGTCCAGAAGGAAAAGGAAT-3’；环引物正向序列：5’-CATGCCCGCTGAAATCACC-3’；环引物反向序列：5’-GTAGTGGTGGGGCTACGAAC-3’组成。

2.一种采用权利要求1所述特异性引物快速检测转基因水稻TT51-1的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)采用权利要求1所述的6条特异引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，当加入DNA模板后在61℃进行60min的恒温扩增，之后在80℃持续2min，可使扩增产物达到109-1010个拷贝；

其中扩增反应的总体积为25μL，其各种成分分别为：10×Buffer 2.5μL，10mMdNTPs 2μL，50mM MgSO4 2μL，12.5×BSA 2μL，625μM Calcein 2μL，12.5mMMnCl2 1μL，引物混合溶液1μL，8000U/ml Bst DNA聚合酶大片段1μL，模板DNA1-5μL，用灭菌去离子水补齐至25μL；

(2)扩增反应结束后，取反应液3-25μL，采用不同方法判断扩增与否，包括：直接通过裸眼观察颜色变化判断有无扩增反应；或通过观察琼脂糖凝胶电泳条带判断扩增结果。

3.如权利要求2所述的检测方法，其中所述的引物混合溶液指的是将合成引物干粉分别配制成浓度为100μM的母液，然后取外引物F3、B3各1μL，内引物FIP、BIP各8μL，环引物LF、LB各1μL，充分混合，制得引物混合溶液。

4.如权利要求2所述的检测方法，其中所述的模板DNA指的是采用CTAB法提取纯化样品得到的DNA，体积为1-5μL。