[发明专利]一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及固体发酵工程领域，尤其涉及一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法。

背景技术

到目前为止，开发应用的饲用微生物的品种很多，但出于对菌种安全性的考虑，我国《饲料添加剂品种目录（2006）》准予使用的有16种。按其菌种类型，饲用微生物添加剂可分为：乳酸杆菌属、芽孢杆菌属、酵母和霉菌。乳酸杆菌（Lactic acid bacteria）是一群杆状或球状的革兰氏阳性细菌，其DNA中G+C含量少于55%，可发酵碳水化合物(主要指葡萄糖)产生大量乳酸，在自然界分布广泛，是动物和人肠道等处的重要的生理性菌群之一。该类群细菌绝大多数对动物和人无毒、无害，负担着动物体内重要的生理功能。在乳酸菌中，乳酸杆菌是最大的一个属，其定义为杆形乳酸杆菌。

乳酸杆菌属与动物关系最密切，它是动物肠道和阴道中占优势的菌群之一。乳杆菌分布广泛，动物和人类从口腔到直肠始终都有该菌存在。乳酸杆菌己知的生理功能主要表现为：阻止病原菌对肠道的入侵和定植，抑制病原菌和抗感染，维持肠道的微生态平衡，预防和抑制肿瘤的发生，增强机体免疫力，促进消化，合成氨基酸和维生素，降低胆固醇，抑制内毒素的生产，延缓衰老和抗辐射等。大量事实证明，只要肠道中乳酸杆菌的数量减少或丢失，出现菌群失调，就可能导致这种或那种疾病的发生；只要肠道中乳酸杆菌的数量增加，区系得到平衡，就可以促进机体健康和治疗某种疾病，可见，增加机体肠道中乳酸杆菌数量是预防和治疗某些疾病的一种重要措施。此外，乳酸杆菌对于妇科炎症、儿童艾滋病、儿童糖尿病等疾病有着确切的防治作用。  

植物乳酸杆菌（L.plantarum）属于乳酸杆菌属，革兰氏阳性菌，最适生长温度为30~37℃，兼性厌氧，在pH4.5~9.5生长，最适pH6.5左右。目前人们所食用的酸奶等乳酸菌制品多是动物性乳酸菌发酵而来的。然而植物性乳酸菌与动物性乳酸菌相比，耐酸和耐胆盐能力更强，且能在营养不均的恶劣环境下生存，所以进入人体肠道存活率更高，定植能力更强。故植物性乳酸菌制品在改善肠道环境、提高机体免疫力方面更有优势。

聚乙二醇PEG-4000可用于药品中的片剂、胶囊剂、薄膜衣、滴丸、栓剂，由于在制片的过程中，PEG的可塑性和它可提高片剂释放药物的能力，高分子量的PEG（PEG4000、PEG6000、PEG8000）作为制造片剂的粘合剂是很有用途的。食品级聚丙烯酸钠系水溶性高分子化合物，具有极强的增稠保水功能，产品纯度高、性能极为稳定、无臭无味，久存不腐败，可广泛应用于面食类、加工食品和冷冻食品，是美国FDA、日本厚生省和中国卫生部批准使用的食品添加剂，对人体无害，易于保存和储藏。经过PEG-4000和聚丙烯酸钠处理过的植物乳酸杆菌固体发酵培养物，菌种活性更加稳定，在加工、运输和储藏过程中活性损失更小，并且由于其缓释作用而能够达到动物肠道，大大提高了植物乳酸杆菌定植动物肠道的能力，大大提高了该制剂生物活性的稳定性。

我们对植物乳酸杆菌固体发酵培养基进行碳源、氮源和缓冲盐的选择、单因素试验和4因素3水平正交试验对其培养基进行改进，得到最佳固体培养基配方，固体干基：以豆饼粉、玉米粉和小麦粉为基础料（质量之比为1:1:1）、葡萄糖5.0%、NaAc 0.5%和CaCO₃ 1.5%。将固体干基加入质量比为1:1~2的无菌水，pH值调为6.5，搅拌均匀。将固体培养基在温度为121℃的条件下，高温高压灭菌20min，待冷却后即可作为固体发酵培养基使用。对乳酸杆菌发酵条件进行优化以得到其最佳培养温度为35~37℃，起始 pH值6.5，接种量10%。将固体发酵的产物经过PEG4000和聚丙烯酸钠处理后，干燥，制得稳定的植物乳酸杆菌制剂。通过具体实施例动物实验表明，该菌的固体发酵培养物在促进食欲、增加体重、防止腹泻等方面具有明显的效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法，以克服现有的植物乳酸杆菌培养物的制备方法存在的上述不足。

实现本发明目的的技术方案如下：

一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法，包括以下步骤：

（1）菌种活化：将-80℃保存的菌种在固体种子培养基固体平板上划线，在温度为37℃的条件下培养16个小时左右，使菌种活化，所述菌种为植物乳酸杆菌；

（2）制备一级种子：将活化的植物乳酸杆菌，用接种环挑取一环接种于300 mL 液体种子培养基中，将三角瓶置于摇床中，在温度为37℃和转数为250rpm的条件下，振荡培养16~20小时后，制得一级种子菌；