[发明专利]一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法

权利要求书

1.一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）菌种活化：将-80℃保存的菌种在固体种子培养基固体平板上划线，在温度为37℃的条件下培养16个小时左右，使菌种活化，所述菌种为植物乳酸杆菌；

（2）制备一级种子：将活化的植物乳酸杆菌，用接种环挑取一环接种于300 mL 液体种子培养基中，将三角瓶置于摇床中，在温度为37℃和转数为250rpm的条件下，振荡培养16~20小时后，制得一级种子菌；

（3）配制固体发酵培养基：将固体干基加入质量比为1:1~2的无菌水，并在pH值为6.5的条件下，搅拌均匀，将固体培养基在温度为121℃的条件下，高温高压灭菌20min，待冷却后即可作为固体发酵培养基使用；

（4）固体发酵：将经过灭菌处理的固体发酵培养基按照10%的接种量接入一级种子菌，搅拌均匀，保持湿度为50~70%和温度为35~37℃的条件下，培养16~20个小时，制得二级种子；

（5）将得到的二级种子，按照步骤（4）进一步固体发酵得到三级种子；

（6）可以根据具体的培养用量，进一步将三级种子按照步骤（4）进一步固体发酵扩大培养；

（7）将植物乳酸杆菌培养物进行菌落计数，要求活菌体浓度可达8.0×10⁹ CFU/g 鲜曲以上；

（8）将烘干的植物乳酸杆菌固体发酵培养物，加入质量比为0.2% 的聚丙烯酸钠和5% 的PEG4000（预先溶解于水），搅拌混匀，干燥制得成品。

2.根据权利要求1所述的植物乳酸杆菌培养物的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的固体种子培养基的组成为：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g和琼脂粉15g。

3.根据权利要求1所述的植物乳酸杆菌培养物的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的液体种子培养基的组成为：蛋白胨 10g、酵母提取物 5g和NaCl 10g。

4.根据权利要求3所述的植物乳酸杆菌培养物的制备方法，其特征在于：所述培养基均通过高温高压灭菌后使用。

5.根据权利要求1所述的植物乳酸杆菌培养物的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中的固体干基为：以豆饼粉、玉米粉和小麦粉为基础料、葡萄糖5.0%、NaAc 0.5%和CaCO₃ 1.5%。

6.根据权利要求5所述的植物乳酸杆菌培养物的制备方法，其特征在于：所述基础料中豆饼粉、玉米粉和小麦粉的质量之比为1:1:1。

7.权利要求1-6任一项所述的植物乳酸杆菌培养物的制备方法制备的植物乳酸杆菌培养物用于动物养殖业中的饲料添加剂。

8.根据权利要求7所述的植物乳酸杆菌培养物用于动物养殖业中的饲料添加剂，其特征在于：所述植物乳酸杆菌制剂作为饲料添加剂的添加量为1~2wt%。