[发明专利]一种从银杏叶提取物中制备山奈酚-3-O-芸香糖苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地说，涉及一种从银杏叶提取物中制备山奈酚-3-O-芸香糖苷的方法。

背景技术

山奈酚-3-O-芸香糖苷是黄酮类化合物，存在于菊科植物红花属、凤仙花科、银杏叶科等植物中。山奈酚-3-O-芸香糖苷具有降低收缩压和舒张压，平均动脉血压和心率的作用，同时具有抗过敏，镇痛和降低血糖的作用，对治疗心脑血管疾病和糖尿病具有很大的应用潜力。目前，对于山奈酚-3-O-芸香糖苷的制备，主要是植物经过醇提，然后经大孔树脂或葡聚糖凝胶等多次柱层析步骤进行分离纯化，操作步骤繁琐，过程复杂，同时需要消耗大量的有机溶剂，耗时费力。从银杏叶提取物中用二维液相色谱－质谱方法制备山奈酚-3-O-芸香糖苷的方法还未见报道。

二维液相色谱技术是通过用两根性质相同或不同的色谱柱对复杂样品进行分离。作为一种分析复杂样品的理想工具，它已被广泛应用于医药卫生、食品科学、环境和农业科学等各个领域。与单维制备色谱相比，二维液相色谱不但具有更高的峰容量，而且两维具有不同的选择性。经过第一维简化的组分可以在第二维上根据不同的选择性而实现互补分离，结构相似的化合物可能在第二维可到有效分离，从而提高制备的效率和化合物纯度。

发明内容

本发明提供一种从银杏叶提取物中制备山奈酚-3-O-芸香糖苷的方法。该方法是以银杏叶提取物为原料，采用二维液相色谱－质谱技术制备山奈酚-3-O-芸香糖苷的方法，山奈酚-3-O-芸香糖苷的纯度可以达到80%以上。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：

一种从银杏叶提取物中制备山奈酚-3-O-芸香糖苷的方法，其特征在于：以银杏叶提取物为原料，经甲醇-水溶液溶解后，得到银杏叶提取物溶液，再经过二维液相色谱分离纯化技术，得到山奈酚-3-O-芸香糖苷。

进一步地说：

所述银杏叶提取物溶于40-80%的甲醇-水溶液，制得银杏叶提取物溶液，银杏叶提取物浓度为10－1000mg/mL。

所述银杏叶提取物最佳溶于50－60%的甲醇－水溶液，银杏叶提取物浓度最佳为250－550mg/mL。

更进一步地说：

所述二维液相色谱分离纯化技术为二维液相色谱－质谱联用进行银杏叶提取物制备山奈酚-3-O-芸香糖苷；采用液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18，二维制备的色谱柱为亲水型TECys色谱柱；

一维液相色谱制备采用的流动相为有机相和水相的混合，洗脱条件按照有机相15－65%等度或0－30分钟有机相由5%提高到60%梯度进行；其中有机相为甲醇或乙腈，水相为水；

对一维收集浓缩后的样品，进行二维液相色谱制备，二维液相色谱制备采用的流动相为有机相与水相混合，洗脱条件按照有机相70－90%等度或经0－20分钟有机相由95%降低到55%梯度进行，二维液相色谱制备根据质谱选择离子指导组分收集；其中有机相为甲醇或乙腈，水相为水；

将二维液相色谱制备收集到的山奈酚-3-O-芸香糖苷馏分进行旋转蒸发浓缩至干，得到山奈酚-3-O-芸香糖苷化合物。

更进一步地说：

所述对保留时间10－30分钟主成分为山奈酚-3-O-芸香糖苷的组分进行收集，旋转蒸发至干，作为一维制备山奈酚-3-O-芸香糖苷粗品。将一维制备山奈酚-3-O-芸香糖苷粗品用40%－80%的甲醇－水溶液溶解，至浓度为20－200mg/mL。

更进一步地说：

所述制备时流动相流速为60－120mL/min，制备时柱温为室温或25－40℃，制备时进样量为200－3000μL/针，检测器为DAD紫外检测器和质谱检测器。

更进一步地说：

所述一维制备最佳流动相为乙腈与水，采用梯度方式，乙腈比例由10%经15－20分钟增加到15%－25%。

所述一维制备收集15－20分钟为主要含山奈酚-3-O-芸香糖苷的组分，一维制备山奈酚-3-O-芸香糖苷粗品用50%－60%的甲醇－水溶液制成浓度为60－100mg/mL的山奈酚-3-O-芸香糖苷粗品溶液。

所述二维制备最佳流动相为乙腈（或含0.1%甲酸）与水（或含0.1%甲酸），采用等度条件，乙腈（或含0.1%甲酸）浓度为75－85%，二维制备质谱选择离子为m/z＝303和287，收集m/z=287的馏分。

更进一步地说：

所述制备时流动相最佳流速为80－100mL/min，制备时柱温为室温，制备时进样量为2000－2500μL/针，紫外检测器为360nm。