[发明专利]一种皂苷异构体分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及皂苷类化合物的分离纯化，具体地说是一种利用亲水作用色谱在醇水洗脱体系中高效分离皂苷异构体的方法。该方法对包含呋喃型阿拉伯糖基、吡喃型阿拉伯糖基或吡喃型木糖基的皂苷异构体表现出较优的分离效果。

背景技术

皂苷（Saponins）是苷元（Sapogenins）为三萜（Triterpenoids）或螺旋甾烷类（Spirostane）化合物的一类糖苷。在皂苷的化学结构中，由于苷元具有不同程度的亲脂性，糖链具有较强的亲水性，使皂苷成为一种表面活性剂，用力振摇其水溶液可产生持久性泡沫。

皂苷类化合物除具有表面活性、溶血、毒鱼等特性外，还具有多种生理功能，是许多中药的主要活性成分。皂苷的生物活性除与苷元有关外，与糖链的结构也关系密切。S.G.Sparg、王楠、张云峰和张存莉等分别对皂苷类化合物具有的生物活性进行了综述，这些活性主要包括防治心血管系统疾病、抗癌、降血糖、降血脂、保肝、抗炎、抗过敏、抗微生物、抗衰老、抗生育等（S.G.Sparg,M.E.Light,J.van Staden,Biological activities and distribution of plant saponins,Journal of Ethnopharmacology94(2004)219-243；王楠.皂苷生物活性的研究进展,医学研究生学报,2007,20(2):211-214；张云峰,魏东,邓雁如,等.三萜皂苷的生物活性研究新进展,中成药,2006,28(9):1349-1353；张存莉,吴战库,马惠玲,等.甾体皂苷的生物活性研究进展,西北林学院学报,2003,18(2):95-100.）。

皂苷的苷元和糖链的结构多样性是皂苷众多生理活性的结构基础，但这种多样性也给皂苷的结构解析带来了很大困难，特别是皂苷异构体。因为常规的核磁表征方法需要毫克级的高纯度皂苷单体。反相色谱是目前皂苷分离中应用最广泛的色谱技术，但对于仅端基糖存在差异的皂苷异构体反相色谱的分离能力常常是不足的。例如，3种常见的人参皂苷（Ginsenosides）Rc,Rb₂和Rb₃，它们的差别仅存在于端基五碳糖上。采用反相色谱进行分离时，即使采用乙腈、甲醇和水三元流动相体系也很难将其有效分离（X.Qiao et al.J.Sep.Sci.2011,34,169-175）。这是因为反相色谱柱对皂苷的亲水选择性不足。而亲水作用色谱却恰恰是利用皂苷的亲水性差异对其进行分离，其有望成为反相色谱的替代色谱模式来分离该类皂苷异构体。

发明内容

本发明涉及一种皂苷异构体的分离纯化方法。采用亲水作用色谱在醇水流动相体系下高效分离皂苷异构体。流动相组成为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或水，无缓冲盐添加，便于样品制备后处理。采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式。

其中所述亲水色谱柱为两性离子柱（Click XIon，北京华谱新创科技有限公司）。色谱操作参数如下：色谱柱内径为4.6-100mm；样品浓度为1mg/mL-1g/mL；进样量为1μL-40mL；流速为0.5-480mL/min；柱温为4-60℃。

所述流动相组成为甲醇-水、乙醇-水、异丙醇-水、异丙醇-甲醇-水或正丁醇-甲醇-水。

采用以醇水为洗脱剂的亲水作用色谱从三七叶提取物中制备获得4组皂苷异构体，包括1个新皂苷、2个首次从三七叶中分得的皂苷，共12个高纯度皂苷。所述化合物的结构信息如下：

所述化合物具体制备方法为：