[发明专利]一种皂苷异构体分离纯化方法

权利要求书

1.一种皂苷异构体分离纯化方法，其特征在于：采用亲水作用色谱从皂苷提取物中分离纯化高纯度皂苷异构体；流动相组成为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇中的一种或两种与水，无缓冲盐添加，便于样品制备后处理；采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式,所述进样体积为10mL；1-55min，每分钟收集一份，共计54个组分，每个组分浓缩至干后备用；针对4个组分，即组分10、组分12、组分17和组分26采用亲水作用色谱进行制备，色谱柱为Click XIon柱。

2.按照权利要求1所述皂苷分离纯化方法，其特征在于：所述流动相组成为甲醇-水、乙醇-水、异丙醇-水、异丙醇-甲醇-水或正丁醇-甲醇-水。

3.一种权利要求1所述皂苷类化合物的制备方法，其特征在于：

1)三七叶水提物先经制备型RPLC分离，色谱条件：色谱柱为碳十八柱C18TDE；水(A)和乙腈(B)流动相体系；洗脱梯度为0-5min,体积浓度20％→32％B；5-45min,体积浓度32％→68％B；45-50min,体积浓度68％→100％B；50-55min,100％B；流速为300mL/min；检测波长为203nm；样品溶液浓度为300mg/mL，其采用体积浓度20％乙腈-80％水溶解；进样体积为10mL；1-55min，每分钟收集一份，共计54个组分，每个组分浓缩至干后备用；针对4个富含皂苷异构体的组分采用亲水作用色谱进行制备，色谱柱为Click XIon柱；根据各个组分的色谱保留特性，流动相中甲醇的体积浓度控制在80％-100％；采用等度洗脱方式制备皂苷异构体；

2)选取组分10采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm；水(A)和甲醇(B)流动相体系；体积浓度92％B等度洗脱；流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得三个化合物；

选取组分12采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm；水(A)和甲醇(B)流动相体系；体积浓度95％B等度洗脱；流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得三个化合物；

选取组分17采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm；100％甲醇等度洗脱；流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得三个化合物；

选取组分26采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm；100％甲醇等度洗脱；流速为1mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得三个化合物。

4.按照权利要求3所述皂苷异构体的制备方法，通过亲水色谱制备获得4组高纯度皂苷异构体，包括1个未知皂苷和2个首次从三七叶中分得的皂苷，共12个皂苷；

所述化合物的结构信息如下：

化合物1为三七皂苷FP2(Notoginsenoside FP2)，分子量为1210，分子式为C₅₈H₉₈O₂₆，R₁为O-glu(2→1)glu(2→1)xyl，R₂为O-glu(6→1)araF；化合物2为未知皂苷-，分子量为1210，分子式为C₅₉H₉₈O₂₆，R₁为O-glu(2→1)glu(2→1)xyl，R₂为O-glu(6→1)araP；化合物3为三七皂苷Fc(Notoginsenoside Fc)，分子量为1210，分子式为C₅₈H₉₈O₂₆，R₁为O-glu(2→1)glu(2→1)xyl，R₂为O-glu(6→1)xyl；化合物4为人参皂苷Rc(Ginsenoside Rc)，分子量为1078，分子式为C₅₃H₉₀O₂₂，R₁为O-glu(2→1)glu，R₂为O-glu(6→1)araF；化合物5为人参皂苷Rb₂(Ginsenoside Rb₂)，分子量为1078，分子式为C₅₃H₉₀O₂₂，R₁为O-glu(2→1)glu，R₂为O-glu(6→1)araP；化合物6为人参皂苷Rb₃(Ginsenoside Rb₃)，分子量为1078，分子式为C₅₃H₉₀O₂₂，R₁为O-glu(2→1)glu，R₂为O-glu(6→1)xyl；化合物7为三七皂苷Fe(Notoginsenoside Fe)，分子量为916，分子式为C₄₇H₈₀O₁₇，R₁为O-glu，R₂为O-glu(6→1)araF；化合物8为西洋参皂苷L1(Quinquenoside-L1)，分子量为916，分子式为C₄₇H₈₀O₁₇，R₁为O-glu，R₂为O-glu(6→1)araP；化合物9为三七皂苷Fd(Notoginsenoside Fd)，分子量为916，分子式为C₄₇H₈₀O₁₇，R₁为O-glu，R₂为O-glu(6→1)xyl；化合物10为人参皂苷Mc(Ginsenoside Mc)，分子量为754，分子式为C₄₁H₇₀O₁₂，R₁为OH，R₂为O-glu(6→1)araF；化合物11为人参皂苷Y(Ginsenoside Y)，分子量为754，分子式为C₄₁H₇₀O₁₂，R₁为OH，R₂为O-glu(6→1)araP；化合物12为绞股蓝皂苷XIII(Gypenoside XIII)，分子量为754，分子式为C₄₁H₇₀O₁₂，R₁为OH，R₂为O-glu(6→1)xyl。