[发明专利]一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用免疫血液学原理，检测人血清中存在的抗体或抗原的方法，尤其是一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法。

背景技术

细菌和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集现象。早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病红细胞抗原和抗体的发现是凝集反应最好的例子。在1901年Kaul Landsteiner证明，当人群之间相互输血时，由于红细胞的血型不同可以引起被输血者有发烧，黄疸。因此，Kaul Landsteiner把血型分成A，B，和O型，而且在实际应用中也说明在血型之间相符的人群间输血是不会有输血反应的，并于1930年获得了诺贝尔奖金。凝集试验灵敏度高，方法简便，迄今已成为通用的免疫学试验，广泛应用于临床检验。1902年A.Decastrello和A.Sturli发现了AB血型。1940年由Levine和Stetson发现了Rh血型，这是根据红细胞膜是否存在这种抗原而把血型分为Rh阳性(也称为D+)为含有这种抗原，Rh阴性(也称为D-)为不含有这种抗原。现在已经清楚，98％以上的中国人为Rh阳性，而白种人仅有70％为Rh阳性。

检测红细胞膜表面的抗原和血清中的抗体来自于血液免疫学的发展，随着科学家可以分离这种抗体和抗原，并利用这些抗体和抗原去检测相应红细胞膜表面的抗原和血清中的抗体。

现已明确在A型红细胞抗原的人都有B型抗体在血浆里，B型红细胞抗原的人都有A型抗体在血浆里，而O型红细胞抗原的人都有A，B型抗体在血浆里，AB型红细胞抗原的人都无A，B，抗体存在血浆里。

在1950年Watkins and Morgan(Nature 180：1038-1040，1957)首先分析了红细胞膜的抗原结构并纯化了许多抗原，发现了红细胞膜表面含有更多的抗原系统，同时，利用这些已知的抗原也检测出在血浆中存在着更多的抗体，而在1980年以后单克隆抗体的发明更进一步的加速了红细胞抗原的发现和发展。许多红细胞抗原的单克隆抗体的发现和生产，促进了更多抗原的发现也加速了这些抗原和抗体在临床上的应用。

市场上可利用的单克隆或多克隆抗体大都用来测定红细胞的表面抗原，像A，B和D，而常用的方法就是红细胞凝集实验。即红细胞抗原和相应，已知的抗体结合后会产生红细胞聚集反应，这种方法称为正向红细胞配型，而采用相应，已知的红细胞抗原和未知的抗体结合后产生红细胞聚集反应，这种方法称为反向红细胞配型，为了更精确的配型，临床上都同时采用这二种方法去检测红细胞血型。

在常规的红细胞配型实验中，待检测红细胞和已知抗体，或待检测血清和已知红细胞抗原，分别在玻璃片，试管，凝胶，检查板混合，通常用于对A，B，O红细胞抗原的测定，而对D型抗原则采用Coomb’s方法，即在待检测红细胞和抗D抗原抗体混合以后，还需加抗人免疫球蛋白抗体，然后才会出现凝结反应，这也称为间接红细胞凝结实验。

在1980年后兴起的单克隆抗体技术，加速了这些抗原的鉴定和发展，由于这些抗体的精确反应以及来源稳定，现在已经替代了大部分在临床上应用的多克隆抗体，但其价格上也比多克隆抗体为贵。

酶联免疫(ELISA)是一种用酶标记抗原或抗体，通过酶催化底物显色，测定抗原或抗体的方法。该法将抗原抗体反应的特异性与酶促反应的高效性和显色性有机地结合起来，具有特异、敏感、简便、易于观察结果。但耗时长，结果不能保存，用试剂量大。

免疫荧光技术是利用抗原抗体反应的特异性，将抗原或抗体标记上荧光素，通常用异硫氰酸盐荧光素(FITC)，与相应的抗原或抗体结合后，在荧光显微镜下可观察到发荧光的抗原抗体反应物。但方法复杂，耗时长，价格高。

放射免疫分析技术是60年代初发展起来的一种新技术，它是把同位素技术的高灵敏度、精确性与抗原抗体反应的专一性结合在一起，在体外测定超微量(微升)物质的技术。该技术已广泛应用在蛋白质、多肽激素、癌相关抗原等的测定上。放射性同位素具有pg级的灵敏度，且利用反复曝光的方法可对痕量物质进行定量检测。但放射性同位素对人体的损伤，而且方法复杂，耗时长，结果不能保存，价格高也限制了该方法的使用。