[发明专利]一种油茶籽中多糖含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖含量的测定方法，特别涉及一种油茶籽中多糖含量的测定方法。

背景技术

油茶，俗称苦茶、建茶、白花茶，因能从其籽中榨取不饱和脂肪酸含量高达93%的茶油而成为优秀的食用植物油之一。同时，研究表明，油茶籽中还含有多糖、茶皂素、黄酮甙及咖啡碱等具有生物活性的有效成分，有很高的研究和应用价值。

植物水溶性多糖是从天然产物中分离出的天然有效成分，具有多种多样的生物活性及药理作用，主要包括：增强免疫、抗肿瘤、降血压、降血脂、降血糖、抗衰老、增强骨髓造血机能、抗辐射、对肝肾等主要脏器的保护作用等，已在保健、疾病治疗等领域广泛使用。因此，植物中的水溶性多糖的含量常用来作为评价一些药用植物质量的指标之一，其含量的测定可以为天然生物资源的开发利用和研究提供有效参考数据，因此如何定量判断油茶籽中茶多糖的含量是人们所关注的。

目前油茶籽多糖含量的测定尚无国家标准，有关油茶籽多糖含量的测定方法鲜有报道，植物水溶性多糖的测定都是沿用粗多糖的测定方法。硫酸-苯酚法是测定多糖含量的经典方法，其原理为：用水提取植物中的多糖类组分，在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长测定其多糖含量。在油茶籽多糖含量测定中，油茶籽多糖在浓硫酸作用下转化为单糖，进而可测定单糖含量。然而由于油茶籽中还含有茶油、茶皂素、黄酮类化合物等其他多种活性成分，因此加大了从油茶籽中有效提取纯度较高的多糖的难度，并且影响了多糖含量测定的精确度。而油茶籽中多糖含量的定量测定成为多糖产品开发、生产以及质量控制中的关键技术问题，因此鉴于现有方法的不足，找到一种如何能精确测定油茶籽中多糖含量的方法成为目前亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是针对目前油茶籽中多糖含量测定方法所存在的不足，提供一种精确定量测定油茶籽中多糖含量的方法，该方法具有可操作性强、测定结果准确、重现性高、在一般常规实验室即可进行测量的优点，并为其他天然产物的多糖含量的精确测定提供了可靠参考依据。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种油茶籽中多糖含量的测定方法，包括以下步骤：

(1)称取烘干磨碎的待测油茶籽，用低极性溶剂对所述油茶籽进行提取，得油茶籽Ⅰ和低极性溶剂提取液；

(2)用质量百分含量为70～85%的乙醇溶液对油茶籽Ⅰ进行提取，得油茶籽Ⅱ和乙醇溶液提取液；

(3)用水对油茶籽Ⅱ进行提取，得水提取液，将所得水提取液定容，作为多糖待测溶液；

(4)采用硫酸-苯酚法测定上述待测溶液中多糖的含量，具体步骤如下：吸取多糖样品溶液，用蒸馏水稀释，得多糖待测溶液，吸取2.0ml多糖待测溶液于试管中，加入5％～10％苯酚试剂1.0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，迅速摇匀，静置后，置于沸水浴中加热，取出后迅速冷却，另以2ml蒸馏水做空白对照，按紫外分光光度法在490nm处测定吸光度，根据标准曲线得出待测液中多糖的质量。

本发明步骤（1）的目的是去除油茶籽中脂溶性成分，如茶油，步骤（2）的目的是去除油茶籽中可溶性甙类物质，如油茶籽皂素、黄酮甙等化合物，由于油茶籽中一些可溶性甙类组分在硫酸作用下也会水解产生单糖，因此采用传统方法测定多糖含量时，这些被水解的单糖也会被当成多糖来定量，因此测定的多糖含量远高于实际值，从而影响定量测定的准确性，所以本发明采用提取的方法先去除油茶籽中脂溶性物质和可溶性甙类物质，不仅能保证有效地提取纯度较高的多糖，而且避免了这些物质对多糖含量测定精确度的影响。

优选地，步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）中的提取方法为索氏提取或多次浸提的方法。

优选地，所述低极性溶剂为石油醚、正戊烷、正己烷、环己烷中的一种或几种混合。

优选地，在步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）中，提取时间为2～6h。

优选地，步骤（1）中的提取温度为60～80℃，步骤（2）中的提取温度为80～100℃，步骤（3）中的提取温度为100～120℃。

优选地，步骤（3）中水提取液的定容体积为100～250ml。

优选地，步骤（4）中多糖样品溶液的吸取量为0.1～15ml。

优选地，步骤（4）中置于沸水浴中的加热时间为12～18min。

优选地，在步骤（4）中，所述多糖样品溶液用蒸馏水稀释的体积倍数为10～1000。

本发明与现有技术相比具有以下优点：