[发明专利]一种剪切DNA的DNA酶

权利要求书

1.一种具有位点特异性内切核酸酶活性的DNA酶，其特征在于，该DNA酶具有第一和第二两个底物结合区域，位于核心区域的两侧，其中所述的第一底物结合区域有一段序列与预先选定的底物核酸序列的第一部分互补，而所述第二底物结合区域有一段序列与预先选定的底物核酸序列的第二部分互补，核心区域有一段选自下列通式所述序列的其中之一的序列：

(I.)CACTGT(SEQ ID NO 10),TGT茎，TC环，TATTCCTGGATAA(SEQ ID NO 9)，其中TGT茎部分通过碱基互补配对，TGT茎可以延长一个碱基对，并且TGT茎上的碱基对可以替换只要符合碱基互补配对原则；

(II)CATCGTAGTGTCAGCCAT(SEQ ID NO 11)，CAT茎，AT环，其中CAT茎部分通过碱基互补配对或“摆动”配对，CAT茎可以延长也可以缩短为只有三个碱基对长度，AT环可以延长也可以缩短为三个碱基；

(III)TGGAT(SEQ ID NO 12)，GAT茎，CA环,CGGGTCC(SEQID NO 13)，其中GAT茎可以延伸或缩短，CA环也可以延伸或缩短，而且GAT茎和CA环部分可以去掉。

2.根据权利要求1所述的DNA酶，其特征在于，中的分子，其中所述的通式I为如SEQ ID NO 6所述的序列。

3.根据权利要求1所述的DNA酶，其特征在于，其中所述的通式I中SEQ ID NO 9中可以有五个突变位点之内的突变或缺失，SEQ ID NO10可以有三个突变位点之内的突变或缺失；或者，TGT茎、TC环部分可以有60个碱基以内的插入或缺失。

4.根据权利要求1所述的DNA酶，其特征在于，其中所述的通式II为如SEQ ID NO 7所述的序列。

5.根据权利要求1所述的DNA酶，其特征在于，其中所述的通式II中SEQ ID NO 11中可以有五个之内位点突变或缺失；或者，CAT茎、AT环可以有60个碱基以内的插入或缺失。

6.根据权利要求1所述的DNA酶，其特征在于，其中所述的通式III为如SEQ ID NO 8所述的序列。

7.根据权利要求1所述的DNA酶，其特征在于，其中所述的通式III中SEQ ID NO 12中可以有三个突变位点之内的突变或缺失；或者，GAT茎、CA环可以有60个碱基以内的插入。

8.根据权利要求1所述的DNA酶，其特征在于，其中所述的第一或第二底物结合区域的长度为3~12个核苷酸；优选包括一段与选自如SEQID NO 13~SEQ ID NO 21的序列互补的核苷酸序列。

9.根据权利要求1所述的DNA酶，其特征在于，其中所述DNA酶的内切核酸酶活性因二价阳离子的存在而增强；其中二价阳离子优选为Mg²⁺，Cu²⁺或Mn²⁺，其中Cu²⁺或Mn²⁺可以使所述DNA酶的催化活性增强。

10.根据权利要求1所述的DNA酶，其特征在于，所述的DNA酶的剪切速率(K_obs)为0.0487h^-1~0.2068h^-1；所述的DNA酶的催化活性可以因氧化剂H₂O₂的加入催化活性增强。