[发明专利]甘蔗黄锈病菌PCR检测方法无效
| 申请号： | 201210397011.9 | 申请日： | 2012-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN102876798A | 公开（公告）日： | 2013-01-16 |
| 发明（设计）人： | 阙友雄;许莉萍;黄宁;郭晋隆;高世武;罗俊;袁照年;陈如凯 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甘蔗 黄锈病 pcr 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种甘蔗黄锈病菌的PCR检测方法，包括基因组DNA的提取、PCR检测体系建立和PCR扩增产物的检测，其特征在于：
（1）PCR检测体系的建立：PCR扩增体系为总体积25 μl，内含2.5 μl 10×PCR缓冲液，2.5 μl 25 mmol/L MgCl2，0.5 μl 10 mmol/L dNTP，10 μmol/L 的检测引物PCR-F和PCR-R各1.0 μl，1.25 U Taq DNA Polymerase，20-30 ng基因组DNA，ddH2O补足到25 μl； PCR扩增程序如下：94 ℃ 4 min；94 ℃ 1 min，56 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min，35个循环；72 ℃8 min；所述10×PCR缓冲液组成成分为100 mmol/L pH8.5 Tris-HCl，500 mmol/L KCl和15 mmol/L MgCl2；所述检测引物如下：
PCR-F：5'-CACATCAAGGAAGGTGTTACCT-3′，
PCR-R：5'-GAGCCACAATTAAGTGCACTCT-3'；
（2）PCR扩增产物的检测：琼脂糖凝胶电泳检测的PCR扩增图谱中，在分子量为525 bp的位置出现DNA条带，为甘蔗黄锈病菌存在的标志。
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