[发明专利]一种抗牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌复合特异性IgY抗体及其制备方法和牙膏

说明书

技术领域

本发明涉及IgY抗体及其制备方法和该IgY制剂的应用，特别涉及抗牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌复合特异性IgY制剂及其制备方法，以及用该IgY抗体制备的预防由这两种菌引起的牙龈炎症及其口臭的牙膏。 

背景技术

我国牙龈、牙周疾病发病率占人口的70%以上，牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis）是慢性龈缘炎、慢性牙周炎、侵袭性牙周炎等牙周病的主要可疑致病菌，其菌毛能够与口腔上皮细胞表面的甘油醛-3-磷酸脱氢酶结合，侵入牙龈上皮细胞和牙龈成纤维细胞，逃避免疫清除。牙龈卟啉单胞菌产生二肽酰氨肽酶降解结缔组织，促进MMP-2和MMP-1活性增加。牙龈卟啉单胞菌的精氨酸和赖氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（RgpA、RgpB、Kgp）能水解L-12导致INNγ产生减少。部分牙龈卟啉单细胞毛能够诱导巨噬细胞表达L-1α、L-1β、L-6、TNF α导致牙槽骨破坏。在牙周病患者同时伴随着口臭的发生，其口臭主要有具核梭杆菌引起。目前没有有效的治疗口臭的方法，使用抗菌素类药物治疗口臭有很多弊端。 

对于预防和治疗牙周病及其口臭从主要的病因菌牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌中着手是关键所在。 

目前用于预防和治疗牙周炎的牙膏一般为含有中草药成分的牙膏。虽然这类的专利有很多，但均无明确疗效。 

现有文献报道表明临床上使用特异性IgY抗体预防龋齿和治疗婴幼儿轮状病毒性腹泻，预防肺纤维化患者绿脓杆菌感染，减轻幽门螺杆菌引起的胃痛效果显著，且无副作用和成瘾性。 

在我们研究的许多种类的IgY中发现，有的牙周病因菌免疫母鸡产生的IgY抗体经实验证明没有或没有明显的抑制牙周病及其口臭的趋势和疗效。简单的 说，不是所有的IgY都有明显的治疗作用。 

由于牙周病及其口臭的可疑病因菌有十一种之多，但主要的可疑病因菌包括牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、伴放线菌放线杆菌、栖牙密螺旋体、福氏拟杆菌、牙龈二氧化碳噬纤维菌等。在探索制备对应的IgY用于治疗牙周病及其口臭的同时，我们推测牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、伴放线菌放线杆菌、栖牙密螺旋体、福氏拟杆菌、牙龈二氧化碳噬纤维菌都有可能引起牙周病及其口臭；因为我们事先无法预测在这当中的哪些菌是引起牙周病及其口臭的主要因素，哪些菌是引起牙周病及其口臭是次要因素。 

我们认为必须有合适的抗牙周病及其口臭的试验来确定哪些菌是引起牙周病及其口臭的主要因素。从而指导制备抗牙周病及其口臭的药物或卫生产品。 

目前的现有技术没有相关的提示指导技术人员发现抗牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌复合IgY是解决治疗牙周病及其口臭的关键。 

技术人员无法预先在不做抗牙周病及其口臭的实验的前提下，预先得知牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌是引起牙周病及其口臭的主要因素。 

技术人员无法预先在不做抗牙周病及其口臭的实验的前提下，预先得知抗牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌复合IgY比单独的抗牙龈卟啉单胞菌IgY、单独的抗具核梭杆菌IgY的效果更好。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题之一在于提供抗牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌复合特异性IgY制剂。 

本发明所要解决的技术问题之二在于提供上述抗牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌复合特异性IgY制剂的制备方法。 

本发明所要解决的技术问题之三在于提供含上述抗牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌复合特异性IgY制剂的用于预防由这两种菌引起的牙周炎症及其口臭的牙膏。 

作为本发明第一方面的抗牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌复合特异性IgY制剂，其特征在于，由10～70重量份的牙龈卟啉单胞菌菌体和菌体碎片与30～90重量份的具核梭杆菌菌体和菌体碎片复合成抗原免疫产蛋母鸡而制备。 

作为本发明第二方面的抗牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌复合特异性IgY制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 

A．牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌培养步骤 

A.1细菌种类：牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis）和具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum）； 

A.2取牙龈卟啉单胞菌（P.g）ATCC33277菌株和具核梭杆菌（Fn）ATCC10953菌株，分别经BHI-S培养基分离培养和扩增培养的牙龈卟啉单细胞菌、具核梭杆菌，并经鉴定确认为牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌而得到牙龈卟啉单胞菌菌体和菌体碎片、具核梭杆菌菌体和菌体碎片； 

B．免疫原制备步骤：