[发明专利]一种红曲色素高产菌株的高通量筛选方法

权利要求书

1.一种高通量筛选红曲色素高产菌株的方法，其特征在于，包括： 

(1)以红曲霉菌为出发菌株，进行诱变处理，获得经诱变处理的菌丝悬液混合体； 

(2)将经诱变处理的菌丝悬液混合体，等量等分后分别加入到装有发酵培养基的深孔板的各孔中进行培养，获得培养液；同时设置对照孔，其中加入等量出发菌株的菌丝悬液；和 

(3)测定在530nm波长下各孔中培养液的吸光度，获得培养液的色价；比较各孔中培养液的色价，追踪出色价高于出发菌株的菌丝悬液混合体，从中分离获取高产菌株单菌落。 

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，采用紫外线照射诱变方法进行诱变处理。 

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的深孔板选自：12孔板、24孔板、48孔板、96孔板、192孔板或384孔板。 

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的深孔板是24孔板；更佳地是方底24深孔板；和/或 

采用酶标仪测定在530nm波长下各孔中培养液的吸光度； 

每孔装发酵培养基50-70μl。 

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，培养条件是：220±50rpm、33±2℃培养40-50小时。 

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，先在一深孔板的孔中进行种子培养：220±50rpm、33±2℃培养40-45小时；之后转移到另一深孔板相应的孔中进行发酵培养：220±50rpm、33±2℃培养45-50小时。 

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，应用酶标仪测定 的方法是：从深孔板各孔中分别移取部分培养液，转移到另一深孔板的相应孔中，每一孔中培养液体积相同，每孔加入70%乙醇(较佳地为一定量70%乙醇)，静置，离心取上清，在530nm波长下测定吸光度(较佳地，上清转移至96孔酶标板中后在530nm波长下测定)。 

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，培养液的色价如下获得：将吸光度乘以培养液的稀释倍数。 

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，从中分离获取高产菌株单菌落的方法是：找到色价高于出发菌株的培养液所在孔所对应的经诱变处理的菌株，转接于新鲜培养基，分离单菌落，发酵鉴定，获得纯种高产菌株。 

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，分离单菌落的方法是：待单菌落长出后，挑取菌落较大，颜色较深的单菌落；或 

发酵鉴定的方法是：220±50rpm、33±2℃培养45-50小时，测定发酵液红曲色素的色价，选择色价显著高于出发菌株的单菌落。