[发明专利]一种毛细管电泳检测蛋白多肽相互作用的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物分析领域，特别涉及一种毛细管电泳检测蛋白多肽相互作用的方法。

背景技术

主要组织相容性复合体蛋白（MHC）由主要组织相容性复合体编码，广泛存在于脊椎动物细胞表面的一个糖蛋白分子大家族。MHC表面有一沟，可与外来抗原的肽链结合，将其提呈给T细胞引起免疫反应。因此研究MHC与蛋白的相互作用对于研究一些疾病的致病机制非常重要。人类白细胞抗原DQ2蛋白（DQ2）是MHC很重要的一种蛋白。

生物分析技术在揭示MHC蛋白和多肽的相互作用中起到了至关重要的作用。目前研究MHC蛋白与多肽相互作用的方法主要有高效凝胶过滤色谱法（HPSEC）（B. J. McFarland, J. F. Katz, A. J. Sant, et al. J. Mol. Biol. 2005, 350, 170-183），荧光偏振法（S. L. De Wall, C. Painter, J. D. Stone, et al. Nat. Chem. Biol. 2006, 2, 197-201），核磁共振法（L. Schmitt, J. J. Boniface, M. M. Davis, et al. J. Mol. Biol. 1999, 286, 207-218）等。然而，现在大多数的分析方法只能测量单个多肽和MHC蛋白的结合过程，而无法反应在生物体内的抗原递呈过程的复杂性—细胞内源多肽和外源抗原同时存在的这种竞争关系。

毛细管电泳（CE）具有高效、高速、微量、低消耗、操作模式多，分离方法开发容易等优点，由于具备如此多的优点以及分离生物大分子的能力，CE成为近年来发展最迅速的分离分析方法之一。尤其是将荧光检测与毛细管电泳相结合，大大提高了检测限，拓展了毛细管电泳的应用。本试验建立的多肽配体和HLA-DQ2蛋白相互作用的检测方法，克服了已有方法存在的缺陷，可满足大批量检测需要，适用范围较广，有较高的精确性及较好的稳定性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：为了克服现有技术对蛋白多肽相互作用检测的不足，本发明提供一种毛细管电泳检测蛋白多肽相互作用的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种毛细管电泳检测蛋白多肽相互作用的方法，首先将DQ2与凝血酶混合，切除DQ2上的αI多肽（LQPFPQPELPY，SEQ IDNO.1）。将外源多肽1荧光标记后与DQ2混合，然后进行毛细管电泳检测，同时检测蛋白多肽复合物和荧光多肽的出峰时间及荧光强度；将S_DQ2-Pep/S_Total作为Y轴，以时间为X轴，得到DQ2与多肽结合的曲线。其中S_DQ2-Pep是DQ2多肽复合物的荧光峰面积积分，S_Total是整个电泳普通的荧光峰面积积分。

本发明方法中所述的毛细管电泳检测中，电泳缓冲液优选为25 mM硼酸缓冲液，pH9.3。所述硼酸缓冲液经0.22 μm滤膜过滤。

本发明的方法还可以同时检测不同外源多肽及不同外源多肽与DQ2的竞争关系。例如，当外源多肽为两种时，将两种不同荧光分子标记的外源多肽1和外源多肽2与DQ2混合，进行毛细管电泳检测，分别记录两种荧光标记物的荧光变化。

将蛋白与多肽混合后，可根据毛细管电泳谱图的变化检测蛋白多肽相互作用。该方法还可以检测两种外源多肽与蛋白相互作用的竞争过程。实验证明，该方法操作简单，检测灵敏度高，所需时间短；可同时检测多个荧光波长，从而减少了误差，提高了检测的准确性。该方法是对传统蛋白多肽相互作用检测技术进行改进，结合多波长荧光检测灵敏度高等优点，建立的一种新的高灵敏蛋白多肽相互作用检测技术。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。

图1 DQ2与外源多肽相互作用示意图。

图2 毛细管电泳荧光检测DQ2与多肽Pep2的相互作用。其中，a是Pep2的电泳谱图；b是DQ2与Pep2混合物的电泳谱图，DQ2/Pep2=1:10；c是DQ2与Pep2混合物的电泳谱图，DQ2/Pep2=10:1。激发光源λ_ex=490 nm。

图3 毛细管电泳荧光检测DQ2与多肽Pep1的相互作用。其中，a是Pep1的电泳谱图；b是DQ2与Pep1混合物的电泳谱图，DQ2/Pep2=10:1。激发光源λ_ex=490 nm。