[发明专利]一种抗鹌鹑IgG单克隆抗体及其在制备鹌鹑血清中抗体检测试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种以抗鹌鹑IgG单克隆抗体为介导的间接ELISA快速检测鹌鹑血清中抗体的试剂盒，并涉及一种使用该种试剂盒快速检测鹌鹑血清中抗体的方法。

背景技术

鹌鹑，作为一种经济禽类，其肉和蛋中含有丰富的蛋白质, 具有较高的营养价值和药用价值, 在我国更有“动物人参”的美誉，从20世纪80年代开始，经过几十年的发展，鹌鹑的养殖规模已经仅次于鸡。随着养殖业的发展，其各种疾病也开始呈现上升趋势，包括新城疫，病毒性腹泻，大肠杆菌等，这给鹌鹑养殖业带来了巨大的经济损失，因而是否能够做到早期诊断和控制鹌鹑疾病显得尤为重要。IgG在血清免疫球蛋白总量中占了70%-80%，是浓度最高的，在抗体介导的反应中起着主要作用，血清中特异性IgG水平的测定已是临床免疫检测和体液免疫研究的常用指标，研制出抗鹌鹑IgG的单克隆抗体，建立鹌鹑血清中不同抗体的间接ELISA法对鹌鹑疾病的诊断，免疫监测，流行病学调查等可以提供一个特异的、可靠的检测方法，该方法所需成本较低廉，而且简便，快捷，适合在临床上应用。

发明内容

本发明提供了一种抗鹌鹑IgG单克隆抗体，以及利用该单克隆抗体制备的间接ELISA检测试剂盒。

本发明所述的抗鹌鹑IgG单克隆抗体，命名为QIgG-5F11，它是由抗鹌鹑IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株QIgG-5F11分泌的。所述抗鹌鹑IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株QIgG-5F11的保藏号是：CGMCC No.6655  。

本发明还公开了抗鹌鹑IgG单克隆抗体QIgG-5F11在制备用于检测鹌鹑血清中抗体的试剂盒中的应用。

一种检测鹌鹑血清中抗体的间接ELISA检测试剂盒，包括以下成分：

（1）包被了不同抗原的ELISA包被板，在板上包被易于感染鹌鹑的各种不同病原；

（2）辣根过氧化物酶（HRP）标记抗的鹌鹑IgG单克隆抗体QIgG-5F11；

（3）洗涤液：0.01mol/L 磷酸盐缓冲液；

（4）显色试剂：TMB粉剂，3%H₂O₂，底物缓冲液。

（5）阴性对照：未免疫鹌鹑阴性血清

（6）阳性对照：阳性血清

   使用上述间接ELISA检测试剂盒检测鹌鹑血清中抗体的方法，其步骤包括：

（1）待检血清作为第一抗体与酶标板上包被的抗原进行反应

将待检血清用0.01mol/L 磷酸盐缓冲液1:00稀释，在酶标板的每个孔中加入100μL，于37℃恒温水浴箱中放置60min；同时加阴性对照、阳性对照；

（2）洗涤

用PBST洗3次，每次3min，甩干；

（3）加辣根过氧化物酶标记的抗鹌鹑IgG单克隆抗体为二抗

将标记的二抗QIgG-5F11^E，稀释到最佳工作浓度，在酶标板的每个孔中加入100μL，于37℃恒温水浴箱中放置60min；

（4）洗涤

用PBST洗5次，每次3min，甩干；

（5）显色

加入新鲜配制的TMB底物，100μL/孔，37℃反应15-20min；

（6）终止

显色后，每孔加入50μL 2mo1/L H₂SO₄终止反应

（7）结果判定

酶标仪读值，测定各孔OD450nm值，进行结果判定。

运用本发明的检测试剂盒可检测鹌鹑血清中的针对包被病原的特异性抗体，本发明可在临床上检测鹌鹑群体是否感染过某些疾病以及对疫苗免疫效果进行评估。本发明试剂盒具有成本低，操作简单，适合大规模推广应用。

具体实施方式

实施例1、抗鹌鹑IgG单克隆抗体的制备及标记

1.抗鹌鹑IgG单克隆抗体的制备及鉴定

1.1 单克隆抗体的制备