[发明专利]一种高特异高敏感检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法

权利要求书

1. 一种高特异高敏感检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法,其特征在于，包括以下步骤：

步骤1）制备反应液

反应液组成及含量为

8u/ul Bst核酸聚合酶                         8u

10X耐热聚合酶反应缓冲液                 1X,MgSO4 2mM

4M 甜菜碱                                    1M

10mM d-NTP混合液                            400μM

内引物

  L-FIP                                  40umol

  L-BIP                                  40umol

外引物

      L-F3                                    5umol

      L-B3                                    5umol

标本核酸                                      20ng

添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到25ul;

步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min，浑浊为阳性;

步骤3）提取临床分离单核细胞增生李斯特氏菌，以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸，多次进行反应，观察它们的阴阳性。

2.根据权利要求1所述的高特异高敏感检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法，其特征在于：所述外引物L-F3的序列为GCTTTTACTTTAGTACTATGGGAAT。

3.根据权利要求2所述的高特异高敏感检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法，其特征在于：所述外引物L-B3的序列为GGAAAATGCAAGAAGAAGTCAT。

4.根据权利要求3所述的高特异高敏感检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法，其特征在于：所述内引物L-FIP的序列为

GGAGTGAATGCAGAAAATCCTCCT-ATTTCAAATAAACTTGACGGCC。

5.根据权利要求4所述的高特异高敏感检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法，其特征在于：所述内引物L-BIP的序列为TGCAACTGCTCTTTAGTAACAGC-CTATAACGTGAATGTTAATGAACC。

6.根据权利要求5所述的高特异高敏感检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法，其特征在于：所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭、钙黄绿素进行实时检查。