[发明专利]高效液相色谱法分析蛹虫草中腺苷和虫草素含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，特别涉及一种高效液相色谱（HPLC）法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法。

背景技术

蛹虫草(又名北虫草、北冬虫夏草)为麦角菌科虫草属真菌蛹草菌(Cordyceps militaris(L.)Link)的干燥子座，是我国特有的名贵药用真菌，具有扩张器官、镇静、抗心律失常、降血压、抗病原微生物、抗恶性肿瘤等多种药理活性。腺苷、虫草素等核苷类成分被作为虫草质量的主要参考指标。腺苷(C₁₀H₁₃N₅O₄，结构式如下所示的（a）)全称腺嘌呤核苷，是核酸的基本结构单位，它具有参与人体代谢和生理调节的功能。虫草素(C₁₀H₁₃N₅O₃，结构式如下所示的（b）)又称虫草菌素、3＇-脱氧腺苷，具有抗菌、消炎、抗氧化、抗肿瘤、调节人体内分泌等作用。

蛹虫草子实体中腺苷和虫草素的含量测定是虫草产品质量控制及代谢途径研究的前提。目前，蛹虫草中腺苷和虫草素的含量测定以高效液相色谱法最为普遍，但多采用磷酸盐溶液与有机相的混合体系作为流动相，而长期使用盐相对液相系统伤害较大。刘小芳等人（刘小芳,薛长湖,常耀光.高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷和虫草素的含量[J].食品科学,2010,31(16):172-175）提出了一种新的测定蛹虫草中腺苷和虫草素含量的方法，其流动相由柠檬酸、醋酸、三乙胺混合溶液及乙腈组成，流动相的成分和制备过程较为复杂。李祥玲等人（李祥玲,胡劲松,陈作红.HPLC测定人工蛹虫草及其培养基中虫草素和腺苷含量[J].湖南师范大学自然科学学报,2010,33(2):107-110）、毛新亮等人（毛新亮,郑国栋,张晨,等.反相高效液相色谱法同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素、肌肝含量方法的研究[J].中南药学,2009,7(12):895-897）虽用甲醇和水作为流动相，但却采用梯度洗脱的方式，过程繁琐。另外，如果采用《保健食品检验与评价技术规范》2003年版中腺苷的提取条件对北虫草子实体进行提取，则提取率偏低。

目前，蛹虫草中腺苷和虫草素的含量测定还没有统一的国标方法，因此确立一个简便可靠的方法一次性进样同时分析腺苷和蛹虫草的含量具有现实意义。

                                                                                    

 发明内容

本发明以人工栽培的蛹虫草子实体为材料，水为提取液，采用超纯水和甲醇为流动相等度洗脱，建立了一种一次进样即可同时测定蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的高效液相色谱分析法，并对提取条件进行了较全面的优化。本发明提供的使用高效液相色谱（HPLC）法测定蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的测定方法，具有提取及分析过程简便快速、回收率高、重复性好的特点，可快速、准确测定蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量，有效测量和控制人工培养蛹虫草子实体产品质量。

本发明的技术方案如下：

一种高效液相色谱法分析蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量的方法，包括如下步骤：

   （1）腺苷和虫草素混合标准溶液制备：称取干燥至恒重的腺苷及虫草素标准品置于容器中，用水溶解并定容作为标准储备液，加超纯水将所述标准储备液稀释成若干不同浓度的腺苷和虫草素混合标准溶液；

    蛹虫草子实体供试溶液制备：将蛹虫草子实体烘干，经粉碎机粉碎后过筛，称取干燥至恒重的蛹虫草子实体粉末样品，加入提取液进行提取，提取结束后分离得上清液，即为蛹虫草子实体供试溶液；

   （2）测定：分别吸取腺苷和虫草素混合标准溶液及蛹虫草子实体供试溶液，过滤后注入进样小瓶，测定蛹虫草子实体供试溶液应呈现与腺苷和虫草素混合标准溶液色谱保留时间相同的色谱峰。

较佳地，所述步骤（1）中，所述腺苷和虫草素混合标准溶液的制备方法为：精确称取干燥至恒重的腺苷及虫草素标准品各4mg，置于50 ml容量瓶中，用50ml水溶解并定容作为标准储备液，浓度记为80μg/ml；

将所述标准储备液用超纯水稀释成2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的腺苷和虫草素混合标准溶液。

较佳地，所述精确称取为精确到0.0001 g。